IL-15-lysate-DC新型前列腺癌疫苗免疫生物學(xué)特性的實驗研究.pdf

1、目的： 探討IL-15基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合腫瘤抗原負(fù)載的新型前列腺癌樹突狀細胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物學(xué)特性。 方法： 1.以小鼠腎臟cDNA為模板用pfx DNA ploymerase擴增mIL-15目的基因，將擴增得到的mIL-15目的基因片段克隆到pGEM-T Easy Vector上，得到mIL15-T克隆載體。從mIL-15-T克隆載體上EcoRI酶切得到mIL-15基因，連接到pShu

2、ttle-GFP-CMV載體上組裝成pShuttle-GFP-mIL-15，再轉(zhuǎn)移到pAdxsi載體上，得到Ad-GFP-mIL-15病毒質(zhì)粒，并完成腺病毒的大量擴增和純化。 2.從C57BL/6小鼠骨髓分離樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)前體細胞，經(jīng)rmGM-CSF、rmIL-4誘導(dǎo)分化制備骨髓源性DC。光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化，流式細胞儀檢測未成熟DC表面共刺激分子表達。收集培養(yǎng)的第5天未成熟DC，通過Ad-

3、GFP-mIL-15轉(zhuǎn)染聯(lián)合RM-1前列腺癌細胞裂解產(chǎn)物(lysate)上清共同修飾DC，制備IL-15/Lysate-DC疫苗。流式細胞儀檢測IL-15/Lysate-DC疫苗細胞表面共刺激分子表達。檢測IL-15/Lysate-DC瘤苗刺激同基因型T淋巴細胞增值能力、誘導(dǎo)CTL及其殺傷腫瘤細胞活性。 結(jié)果： 1.將所構(gòu)建的Ad-GFP-mIL-15病毒質(zhì)粒經(jīng)酶切、電泳、測序及RT-PCR鑒定證實病毒質(zhì)粒構(gòu)建正確，插入

4、片段包含mIL-15基因序列。 2.經(jīng)流式細胞儀檢測IL-15/Lysate-DC疫苗DC細胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c及MHC-Ⅱ分子表達上調(diào)。其細胞表面共刺激分子CD80、CD40與其它各組DC比較差異有顯著性(P<0.05)。IL-15/Lysate-DC疫苗刺激同基因T淋巴細胞增殖能力明顯增高，較GFP/Lysate-DC、Lysate-DC差異有顯著性(P<0.05)。誘導(dǎo)CTL及其殺傷腫瘤

5、細胞活性實驗結(jié)果提示IL-15/Lysate-DC疫苗對于特異性殺傷腫瘤細胞作用優(yōu)于Lysate-DC疫苗及GFP/lysate-DC疫苗(P<0.05)。 結(jié)論： 成功構(gòu)建了含mIL15基因的Ad-GFP-mIL-15病毒質(zhì)粒；IL-15/Lysate-DC可以有效上調(diào)DC表面特異性共刺激分子表達，促進DC成熟；IL-15/Lysate-DC可以有效刺激同基因型T細胞增值能力；能誘導(dǎo)特異性CTL分化并對RM-1細胞有顯