羥基喜樹堿脂質(zhì)體抑制肝癌介入栓塞后缺氧應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分羥基喜樹堿脂質(zhì)體對(duì)缺氧誘導(dǎo)的兔VX2細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞HepG2缺氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)的影響
　　目的:選取兔VX2細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞HepG2,體外研究羥基喜樹堿脂質(zhì)體對(duì)肝腫瘤細(xì)胞HIF-1α表達(dá)的影響。
　　材料與方法:體外培養(yǎng)人HepG2肝癌細(xì)胞和兔VX2瘤細(xì)胞,分別在常氧(21％O2)和缺氧(1%O2)條件下采用不同濃度的羥喜樹堿脂質(zhì)體處理兩種腫瘤細(xì)胞。采用CCK-8試劑盒檢測羥基喜樹堿脂質(zhì)體對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的毒性效

2、應(yīng)。采用RT-PCR檢測兩種細(xì)胞HIF-1αmRNA的表達(dá),采用Westernblot檢測相應(yīng)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:在常氧和缺氧兩種狀態(tài)下,HCPT-lipo對(duì)VX2和HepG2兩種細(xì)胞的毒性作用無差異。缺氧不影響HIF-1αmRNA表達(dá),但是可以上調(diào)HIF-1α蛋白表達(dá)。隨著HCPT-lipo濃度增高,其對(duì)HIF-1α蛋白抑制作用加強(qiáng)。
　　結(jié)論:HCPT-lipo能夠抑制缺氧誘導(dǎo)的HepG2和VX2細(xì)胞HIF-1α蛋白

3、表達(dá),該抑制效應(yīng)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平;HCPT-lipo對(duì)腫瘤細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)抑制作用與藥物本身的細(xì)胞毒效應(yīng)不具有相關(guān)性;該抑制作用具有劑量依賴性。
　　第二部分兔肝VX2瘤介入栓塞后缺氧誘導(dǎo)因子1α的表達(dá)及其與血管生成VEGF、多重耐藥MDR1、浸潤和轉(zhuǎn)移MMP-2的關(guān)系
　　目的:研究肝癌動(dòng)物模型介入栓塞術(shù)后缺氧誘導(dǎo)因子1α的表達(dá)及其與血管生成VEGF、多重耐藥MDR1、浸潤和轉(zhuǎn)移MMP-2的關(guān)系。
　　材料與

4、方法:建立20只VX2兔肝癌模型,實(shí)驗(yàn)組(n=10)經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈栓塞處理,栓塞材料為150~250μm大小聚乙烯醇(PVA)。對(duì)照組(n=10)經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈推注生理鹽水處理。于干預(yù)后6小時(shí),3天處死動(dòng)物模型。采用RT-PCR檢測缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、多重耐藥(MDR1)、浸潤和轉(zhuǎn)移(MMP-2)mRNA的表達(dá);采用免疫組化染色檢測HIF-1α、VEGF、MMP-2和P-gp蛋白表達(dá)。
　　結(jié)

5、果:成功建立兔肝癌模型,MR檢測腫瘤大小,組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.524)。實(shí)驗(yàn)組HIF-1α蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P=0.001)。HIF-1α、VEGF、MDR1、MMP-2mRNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組(分別為P=0.00、P=0.00、P=0.00),并且HIF-1α蛋白表達(dá)水平與VEGF、MMP-2、MDR1mRNA和蛋白表達(dá)存在相關(guān)性(mRNA分別為r=0.635、r=0.773、r=0.758;蛋白分別為r=0.8

6、18、r=0.634、r=0.683)。
　　結(jié)論:肝癌介入栓塞后缺氧,殘存腫瘤細(xì)胞感受缺氧并誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá),并且上調(diào)VEGF、MMP-2、MDR1轉(zhuǎn)錄活性,與相應(yīng)蛋白表達(dá)具有顯著相關(guān)性。
　　第三部分羥喜樹堿脂質(zhì)體對(duì)兔肝VX2瘤介入栓塞后缺氧誘導(dǎo)因子1α的表達(dá)及、血管生成VEGF、多重耐藥MDR1、浸潤和轉(zhuǎn)移MMP-2的抑制作用
　　目的:研究經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈內(nèi)給藥羥基喜樹堿脂質(zhì)體對(duì)肝癌動(dòng)物模型介入栓塞術(shù)后缺氧應(yīng)答

7、的抑制作用。
　　材料與方法:將40只兔VX2肝癌模型隨機(jī)分為4組,每組10只。干預(yù)方式及分組:A組:HCPT-lipo與碘油混懸后經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注+聚乙烯醇(PVA)栓塞;B組:PVA經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈栓塞;C組:HCPT-lipo經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注;D組:生理鹽水經(jīng)導(dǎo)管灌注。分別于干預(yù)后6小時(shí),3天處死動(dòng)物模型。采用免疫組化染色檢測HIF-1α、VEGF、、MMP-2多重耐藥蛋白P-gp蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:B組HIF-1α、VEGF