GM-CSF與豬瘟病毒E2基因共表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答.pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種豬的高度接觸性烈性傳染病，死亡率極高，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。我國(guó)己將豬瘟列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。60年代我國(guó)研制的豬瘟兔化弱毒疫苗在豬瘟病毒防治中起了決定性作用，有效的控制了豬瘟在我國(guó)大規(guī)模的流行。但是近年來(lái)，豬瘟在各地仍不斷有散發(fā)和流行。傳統(tǒng)疫苗可能已無(wú)法有效地控制該病。因此，發(fā)展安全、有效的新型疫苗控制CSF變得非常的緊迫。佐劑是提高核

2、酸疫苗免疫保護(hù)力的重要途徑。本研究構(gòu)建pcE2與粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)共表達(dá)載體，以探討GM-CSF對(duì)核酸疫苗pcE2免疫保護(hù)力的影響。 1、GM-CSF與豬瘟病毒E2基因共表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答：為探討粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)對(duì)豬瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫應(yīng)答誘導(dǎo)的影響。將CSFV E2基因和GM-CSF片段插入真核表達(dá)載體pcDNA3.0內(nèi)構(gòu)建pcE2，pcE2-GF及

3、pcGF核酸疫苗。動(dòng)物試驗(yàn)時(shí)，50只雌性供試小鼠隨機(jī)分為5組，即pcE2(A組)，pcE2-GF(B組)，pcDNA3.0(C組)，pcGF(D組)，生理鹽水(E組)，每組10只。0，2，4周于小鼠左后肢脛前肌進(jìn)行肌注免疫，質(zhì)粒量為每只每次50μg。每次免疫前和末次免疫后2周尾靜脈采血收集血清，ELISA檢測(cè)血清內(nèi)特異性IgG水平。末次免疫后1周每組隨機(jī)選3只無(wú)菌取脾，MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖情況。結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，poE2和p

4、cE2-GF3次免疫小鼠，IgG抗體水平逐漸增高，淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率也明顯增高，且pcE2-GF免疫組的IgG抗體水平和淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率均高于pcE2免疫組。 2、GM-CSF與豬瘟病毒E2基因共表達(dá)載體的粘膜免疫：為探討豬瘟核酸疫苗粘膜免疫誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的情況，將50只雌性供試小鼠隨機(jī)分為5組，即pcE2(A組)，pcE2-GF(B組)，pcDNA3.0(C組)，pcGF(D組)，生理鹽水(E組)，每組10只，于0、2、4周，各滴

5、鼻免疫1次，共3次。免疫劑量為每只每次5％司本+1％甘油+50μg DNA質(zhì)粒，免疫的總體積為20μl/只/次，生理鹽水為每只每次20μl。每次免疫前和術(shù)次免疫后2周尾靜脈采血收集血清和小鼠新鮮糞便。ELISA檢測(cè)血清內(nèi)特異性IgG、IgA水平和糞便內(nèi)的slgA水平。結(jié)果表明，pcE2免疫組和pcE2-GF免疫組均可誘導(dǎo)全身免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答，加強(qiáng)免疫后的抗體水平逐漸升高，糞樣中的sIgA也有明顯的升高，且pcE2-GF共表達(dá)疫苗免