超支化聚己內(nèi)酯-聚縮水甘油醚共聚物的合成及在基因傳遞載體方面的應(yīng)用.pdf

1、聚己內(nèi)酯類材料由于其良好的生物相容性及長(zhǎng)效降解性，在藥物控釋載體、基因轉(zhuǎn)染等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。聚縮水甘油醚是一類具有超支狀結(jié)構(gòu)，帶有大量可修飾末端基團(tuán)的高分子聚合材料，具有很好的溶解性和生物相容性。本研究合成了一種新型的超支化聚己內(nèi)酯/聚縮水甘油醚共聚物(poly(epsilon—caprolactone)—b—hyperbranched polyglycidol，PCL—b—HPG)。PCL—b—HPG具有兩親性且?guī)в写罅苛u基末

2、端基團(tuán)，能改善聚己內(nèi)酯的親水性和可修飾性。將PCL—b—HPG制備成納米膠束，考察了其細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)染效果，末端偶聯(lián)RGD多肽，以期為開發(fā)新型靶向藥物傳遞系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。 首先以辛酸亞錫(Sn(Oct)2)為催化劑、月桂醇(1—Dodecanol)為引發(fā)劑，將己內(nèi)酯單體聚合成一定分子量羥端基聚己內(nèi)酯。隨后采用陰離子聚合法，以二氧六環(huán)為溶劑，在萘鉀為催化劑作用下，使羥端基聚己內(nèi)酯引發(fā)縮水甘油醚聚合，合成了PCL—b—HPG。所得產(chǎn)

3、物結(jié)構(gòu)通過核磁共振氫譜(H1NMR)、紅外光譜(IR)和葡聚糖凝膠色譜(GPC)進(jìn)行了表征。進(jìn)一步對(duì)PCL—b—HPG嵌段共聚物反應(yīng)條件進(jìn)行考察，實(shí)驗(yàn)證實(shí)反應(yīng)時(shí)間為5h，滴加速度小于1mL/h時(shí)，反應(yīng)條件最優(yōu)。 此外采用活性聚合法，以負(fù)離子絡(luò)合型催化劑雙金屬μ—氧橋烷氧化物([(n—BuO)2AlO]2Zn)催化ε—己內(nèi)酯聚合，得到活性PCL預(yù)聚物，進(jìn)一步引發(fā)縮水甘油醚聚合，成功的合成了帶有大量端羥基的AB型嵌段共聚物PCL—b

4、—HPG。與陰離子聚合法相比，通過“活”性聚合得到的嵌段共聚物的多分散度Mw/Mn為1.3左右，分散性較低。GPC、1HNMR、DSC測(cè)定結(jié)果表明所得共聚物的結(jié)構(gòu)基本符合預(yù)定結(jié)構(gòu)。當(dāng)己內(nèi)酯和縮水甘油醚單體投料摩爾比為1：2時(shí)，反應(yīng)時(shí)間10h，縮水甘油醚單體滴液速度為2mL/h，達(dá)到最適反應(yīng)條件。 采用界面沉淀法成功制備了PCL—b—HPG納米膠束。通過TEM、SEM和粒徑分析儀觀察，所得納米膠束為球形，形狀均勻，粒徑為(170±

5、10.0)nm。采用MTT法，檢測(cè)了PCL—b—HPG納米膠束的細(xì)胞毒性，并制備了載pEGFP—C1基因納米膠束，所制備的納米膠束的平均粒徑約為225nm，pEGFP—C1質(zhì)粒的含量約占2％，基因包埋效率在85％以上。凝膠阻滯電泳實(shí)驗(yàn)，顯示以納米膠束的形式裝載基因，泳道中出現(xiàn)了明顯的拖帶，表明PCL—b—HPG納米膠束能有效的包裹質(zhì)粒DNA分子，體外EA．hy926細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證實(shí)PCL—b—HPG載基因納米膠束能夠轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，轉(zhuǎn)染