四乙?；炙庈站酆衔锬z束抗腦卒中的研究.pdf

1、臨床上針對急性缺血腦卒中的首選療法是及時溶栓以促進缺血腦組織的再灌注，然而再灌注會引發(fā)缺血腦組織的進一步損傷。因此，減少缺血再灌注損傷是治療缺血性腦卒中的關(guān)鍵。西醫(yī)臨床中常采用自由基清除劑例如超氧化物歧化酶(SOD)、依達拉奉等藥物治療腦缺血再灌注損傷。傳統(tǒng)中藥如芍藥在治療缺血腦卒中方面具有1500多年的歷史?，F(xiàn)代藥理學(xué)試驗證實芍藥苷(PF)（芍藥的主要有效成分之一）能夠顯著降低腦缺血再灌注模型大鼠的腦部梗死面積、改善其神經(jīng)損傷的行為學(xué)

2、狀況以及增加超氧化物歧化酶的含量。PF水溶性極強，半衰期短，口服生物利用度極低。四乙?；炙庈?4AC-PF)是PF的四乙?；苌?，結(jié)構(gòu)改造的目的是為了增加PF的脂溶性，增加其半衰期和藥效持續(xù)時間，前期工作表明它具有與PF本身相同的藥效，但是其水溶性急劇下降（約2μg/mL），導(dǎo)致其給藥困難。近年，具有核-殼結(jié)構(gòu)的聚合物膠束在解決難溶性藥物的增溶方面具有廣泛的應(yīng)用。兩親性嵌段共聚物材料Pluronic P123(EO20-PO70-E

3、O20)在藥物增溶方面具有突出的優(yōu)勢，其相對較長的PO鏈段組成的疏水性內(nèi)核可以高效的增溶藥物，而親水性的EO鏈段組成的外殼在體內(nèi)具有長循環(huán)作用。為此，我們構(gòu)建了以Pluronic P123為載體的4AC-PF聚合物膠束遞藥系統(tǒng)，并探索其在腦缺血再灌注損傷方面的治療效果。本研究的主要內(nèi)容包括：
　?、沤?AC-PF的體內(nèi)外分析方法;載4AC-PFPluronic P123聚合物膠束的處方工藝研究及其表征;以大腦中動脈阻塞再灌流(t

4、-MCAO)大鼠為模型動物，考察4AC-PF Pluronic P123聚合物膠束的藥效;最后進行了4AC-PF Pluronic P123聚合物膠束在t-MCAO大鼠的腦組織以及其他臟器組織上的分布。采用薄膜水化法制備了4AC-PF Pluronic P123聚合物膠束。單因素試驗考察結(jié)果表明:投藥量和水化介質(zhì)體積對包封率(X)和載藥量(Y)影響最大。投藥量增加，包封率下降、載藥量上升;水化介質(zhì)體積增加，包封率和載藥量呈先上升后下降的

5、拋物線變化。進一步采用兩因素、五水平的星點設(shè)計-效應(yīng)面優(yōu)化法對聚合物膠束進行處方優(yōu)化。星點優(yōu)化后得到以包封率(EE％)和載藥量(DL％)為指標的優(yōu)化方程為:EE％=1.16+1.04X-0.90Y-1.11X2-0.67Y2+0.97XY;DL％=0.02+0.22X-0.11Y-0.15X2-0.01 Y2+0.12XY。二維等高線疊加后，在優(yōu)選區(qū)域內(nèi)確定的優(yōu)化處方為:4AC-PF投藥量為1.2mg，水化介質(zhì)體積為1mL（載體用量為1

6、0mg）。聚合物膠束的粒度分布測定結(jié)果顯示:膠束的粒徑約為20nm，分布范圍窄;透射電鏡形態(tài)學(xué)表征結(jié)果表明:膠束呈圓球狀，邊緣光滑;4AC-PF形成聚合物膠束后，其在水溶液中溶解度提高了585倍;聚合物膠束的體外釋放試驗結(jié)果顯示，4AC-PF在含1‰ Tween-80的pH7.4 PBS溶液中經(jīng)48h釋放僅為28.5％，說明膠束在生理環(huán)境內(nèi)穩(wěn)定，不會產(chǎn)生大量的藥物泄漏。
　?、?AC-PF Pluronic P123聚合物膠束在大

7、鼠短暫性大腦中動脈阻塞再灌注(t-MCAO)模型上的藥效學(xué)試驗結(jié)果顯示，4AC-PF聚合物膠束與MCAO模型組、空白膠束組、PF溶液組相比，能夠明顯改善神經(jīng)行為學(xué)損傷狀況(P＜0.01);縮小MCAO模型大鼠的腦部梗死面積約35.3％(P＜0.05)，提高缺血側(cè)腦半球的SOD含量約2.8倍(P＜0.001)，改善因氧化應(yīng)激引起的缺血側(cè)腦部海馬CAI區(qū)域和紋狀體區(qū)域的神經(jīng)細胞核質(zhì)皺縮和細胞器腫脹裂解現(xiàn)象。進一步考察4AC-PF聚合物膠束靜

8、脈注射后在t-MCAO大鼠腦組織和其他臟器組織的分布情況，選擇4AC-PF溶液劑作為對照。研究結(jié)果表明，相對于非缺血側(cè)，4AC-PF聚合物膠束在缺血側(cè)的藥物含量在3h、12h和24h分別是非缺血側(cè)的5.00倍(P＜0.01)、8.33倍(P＜0.01)和5.25倍(P＜0.001)，證明4AC-PF PluronicP123聚合物膠束具有被動靶向于缺血側(cè)腦組織的作用。與4AC-PF溶液相比，聚合物膠束在3h、12h和24h缺血側(cè)腦組織中

9、4AC-PF的含量分別是溶液劑的4.23倍(P＜0.01)、2.08倍(P＜0.05)和10.50倍(P＜0.01)，顯示聚合物膠束可顯著延長4AC-PF在MCAO大鼠體內(nèi)的循環(huán)時間，具有緩釋長循環(huán)作用。另外，膠束增加藥物在腎臟、肺和脾臟中的分布量，減少藥物在肝臟中的蓄積。
　?、茄芯拷Y(jié)果表明，包載4AC-PF的Pluronic P123聚合物膠束對于難溶性藥物4AC-PF具有增溶、緩釋和靶向的作用。聚合物膠束能夠顯著改善t-MC