國(guó)槐種子形態(tài)變異與品種-無(wú)性系SRAP分子識(shí)別研究.pdf

1、國(guó)槐(Sophora japonica L.)，小到中等喬木，是我國(guó)優(yōu)良的材用、藥用、食用和觀賞樹(shù)種。國(guó)槐自然分布于中國(guó)、朝鮮和日本，廣泛引種栽培于世界其他各地。
　　本研究在國(guó)槐浙江杭州、湖北孝感、陜西西安、陜西咸陽(yáng)、北京、河南濮陽(yáng)和山東泰安等7個(gè)群體中，各隨機(jī)抽取130個(gè)單株作為采種樣株，對(duì)其種子的長(zhǎng)、寬、長(zhǎng)寬比、表面積、體積和千粒重等6個(gè)性狀作了觀測(cè)分析，采用巢氏設(shè)計(jì)進(jìn)行了方差分析，相關(guān)性和聚類等統(tǒng)計(jì)分析，分析不同性狀的表型

2、變異及規(guī)律，試圖為國(guó)槐遺傳多樣性研究提供量化指標(biāo)，為國(guó)槐遺傳資源評(píng)價(jià)、保存和利用提供依據(jù)。以北京市豐臺(tái)苗圃基地收集保存的國(guó)槐品種和無(wú)性系為試驗(yàn)材料，旨在探討國(guó)槐DNA的提取和SRAP-PCR的最佳反應(yīng)體系，為進(jìn)一步開(kāi)展國(guó)槐遺傳資源的SRAP分析，在分子水平上鑒別品種與無(wú)性系及其親緣關(guān)系提供科學(xué)依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1國(guó)槐種子的形態(tài)性狀存在不同程度的變異，變異系數(shù)范圍為5.24％-14.57%；6個(gè)表型性狀在群體

3、間和群體內(nèi)都達(dá)到了極顯著水平；6個(gè)性狀的平均表型分化系數(shù)為53.11%，表明群體間遺傳變異略高于群體內(nèi)；種子形態(tài)性狀與地理緯度和經(jīng)度的相關(guān)程度較低。利用分析結(jié)果顯示7個(gè)國(guó)槐群體可以分為3類：1）泰安群體；2）湖北孝感和北京群體；3）浙江杭州，西安，咸陽(yáng)和河南濮陽(yáng)聚為一類。研究發(fā)現(xiàn)，國(guó)槐種子沒(méi)有明顯的地理變異規(guī)律，可能是長(zhǎng)期地人為栽培造成的，也可能是由于采樣的不全面或不連續(xù)性造成的。
　　2采用正交試驗(yàn)確定了國(guó)槐的最佳SRAP-PC

4、R反應(yīng)體系（20 uL）：Taq聚合酶1.5 U，dNTPs0.30 mmol/L，模板DNA90 ng，Mg2+2.0 mmol/L，引物0.3 umol/L，ddH2O補(bǔ)至20 uL。
　　3從120對(duì)引物組合中，篩選出12對(duì)PCR產(chǎn)物條帶清晰、多態(tài)性高的引物組合，進(jìn)行國(guó)槐品種與無(wú)性系的親緣關(guān)系的分子識(shí)別研究。12對(duì)引物PCR擴(kuò)增的條帶大多集中在100bp-2000bp之間。在所獲得的430條擴(kuò)增條帶，415條具有多態(tài)性位點(diǎn)，

5、多態(tài)性位點(diǎn)比率為96.60%，其中4對(duì)引物的多態(tài)性達(dá)到了100%。試驗(yàn)結(jié)果還表明，SRAP能檢測(cè)國(guó)槐品種及無(wú)性系的多個(gè)遺傳位點(diǎn)。采用Em9-Me12引物組合可以很好的區(qū)分國(guó)槐的不同品種及無(wú)性系，并建立了國(guó)槐的SRAP指紋圖譜。
　　4國(guó)槐品種和無(wú)性系的遺傳相似系數(shù)（SM）為0.68-0.89，平均相似系數(shù)為0.73，說(shuō)明國(guó)槐品種和無(wú)性系間的相似性比較高，遺傳基礎(chǔ)比較窄。可能是由于國(guó)槐栽培歷史悠久，長(zhǎng)期的人工栽培造成的，也有可能是品

6、種選擇和無(wú)性系選擇的范圍比較小，造成了國(guó)槐品種和無(wú)性系間的遺傳距離比較小?；谶z傳相似系數(shù)SM，按非加權(quán)配對(duì)算術(shù)平均法對(duì)國(guó)槐品種和無(wú)性系進(jìn)行聚類分析，在相似系數(shù)0.76處，將其分為4類，第二類為國(guó)槐4號(hào)和國(guó)槐35號(hào)；第三類為蝴蝶槐（S. japonica var.oligophylla Franch）；第四類為龍爪槐（S. japonica var. pendula Loud.），曹州2號(hào)（S. japonica‘Caozhou2’）和