維生素D對化學物致DNA損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:探討維生素D對環(huán)磷酰胺和苯致DNA損傷的保護作用。
　　 方法:(1)CHL細胞（中國倉鼠肺成纖維細胞）在含1，25(OH)2D3濃度為0、10、20、50、100nM的培養(yǎng)液培養(yǎng)后加入S9混合液和終濃度為50μg/ml的環(huán)磷酰胺進行處理。染色體畸變實驗觀察CHL細胞染色體畸變情況。免疫熒光法檢測細胞中γ-H2AX焦點形成。流式細胞儀測定CHL細胞ROS水平。(2)雄性ICR小鼠隨機分為5組，其中四組小鼠給予0、1000、

2、5000、10000IU維生素D3總體積為0.1ml的茶油注射液，共兩周，每周一次，最后一次注射后給予40mg/kg環(huán)磷酰胺腹腔注射。流式細胞儀自動化檢測方法分析小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率。彗星實驗檢測小鼠淋巴細胞損傷情況。免疫熒光法檢測骨髓細胞γ-H2AX焦點形成。流式細胞儀測定骨髓細胞內(nèi)ROS水平。(3)ICR小鼠隨機分為正常對照組、苯染毒組和VD+苯處理組。VD+苯處理組在染苯處理前提前一周給予維生素D3注射，另外兩組給予等量注射

3、用茶油。在第2次維生素D3注射后對苯染毒組和VD+苯處理組小鼠染苯處理。流式細胞儀檢測小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率。彗星實驗檢測小鼠外周血淋巴細胞損傷情況。ROS熒光探針流式細胞儀檢測小鼠骨髓細胞活性氧水平。
　　 結(jié)果:(1)體外試驗顯示給予環(huán)磷酰胺處理以后CHL細胞畸變率顯著升高，且細胞內(nèi)γ-H2AX焦點數(shù)目升高明顯，說明環(huán)磷酰胺引起CHL細胞DNA嚴重損傷。染色體畸變分析和γ-H2AX檢測結(jié)果顯示1，25(OH)2D3處理后

4、CHL細胞DNA損傷有顯著改善。(2)體內(nèi)試驗顯示環(huán)磷酰胺處理小鼠嗜多染紅細胞微核率和彗星實驗各指標以及骨髓細胞γ-H2AX焦點數(shù)目顯著上升，DNA損傷嚴重。維生素D處理組小鼠嗜多染紅細胞微核率下降明顯，與單純環(huán)磷酰胺處理組相比，彗星實驗的尾部DNA百分含量、彗尾長度和Olive尾距三者均明顯下降，γ-H2AX檢測結(jié)果顯示維生素D3可以減輕DNA雙鍵斷裂程度。(3)與正常對照組相比，小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率和彗星實驗各指標顯示苯染毒組

5、DNA損傷嚴重，骨髓細胞ROS水平顯著升高。經(jīng)維生素D處理后小鼠微核率和彗星實驗各指標明顯下降，DNA損傷情況有明顯改善，VD+苯處理組小鼠骨髓細胞ROS水平顯著低于苯染毒組。
　　 結(jié)論:(1)活性維生素D可以減少環(huán)磷酰胺致CHL細胞的染色體畸變率，這種保護作用與其減少γ-H2AX的陽性表達有關(guān)。(2)維生素D可以減少環(huán)磷酰胺致小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率以及外周血淋巴細胞DNA的損傷效應。這種保護作用與其可以減少嚴重DNA雙鏈