藏藥濕生扁蕾中口山酮類化合物抗癌活性及其機(jī)理研究.pdf

1、癌癥是一種因細(xì)胞增殖失控而引發(fā)的嚴(yán)重疾病。全世界每年的死亡人數(shù)中每100，000人中至少有100到350人死于癌癥；而在中國(guó)每年的疾病死亡人口中有高達(dá)1/5的人是死于癌癥及其相關(guān)疾病。癌癥的治療一直是各國(guó)醫(yī)學(xué)工作者所熱切關(guān)注的研究課題。
　　 濕生扁蕾是龍膽科（Gentianaceae）扁蕾屬（Gentianopsis plaudosa Ma）一年生草本植物，主要分布在中國(guó)，印度，尼泊爾，不丹及錫金等國(guó)。作為一種傳統(tǒng)中藥，該植物

2、在青藏高原地區(qū)被廣泛運(yùn)用，臨床主要用于肝炎，腸胃炎，結(jié)膜炎，急性腎盂腎炎等癥的治療。近年來(lái)，隨著濕生扁蕾有效成分研究的深入，其新的藥效成分及功效也不斷被發(fā)現(xiàn)。
　　 本研究對(duì)藏藥濕生扁蕾中四種口山酮化合物的抗癌活性進(jìn)行了篩選（1，8-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮(Compound 1)、1-羥基-3，7，8-三甲氧基口山酮（Compound 2）、1，7-二羥基-3，8-二甲氧基口山酮（Compound 3）、1-0-β-D-

3、葡萄糖苷-7-羥基-3.8-二甲氧基口山酮（Compound 4））。利用SRB法對(duì)四種化合物的細(xì)胞毒性進(jìn)行了檢測(cè)；并通過(guò)集落形成法，臺(tái)盼藍(lán)排染法，AO/EB雙染法，DNA瓊脂糖凝膠電泳及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)四種化合物的體外細(xì)胞增殖抑制能力和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力進(jìn)行了系統(tǒng)檢測(cè)；并對(duì)四種化合物的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了系統(tǒng)分析。結(jié)果顯示，Compound 1~4對(duì)HepG2細(xì)胞和HL-60細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能夠顯著抑制兩種細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。

4、其毒活性趨勢(shì)為：HepG2細(xì)胞中，Compound 3>Compound 2> Compound 4> Compound 1；HL-60細(xì)胞中，Compound 2>Compound 3> Compound 4> Compound 1。通過(guò)對(duì)其構(gòu)效關(guān)系分析，結(jié)果顯示口山酮結(jié)構(gòu)中C-8位的甲氧基較羥基具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒貢獻(xiàn)；而對(duì)于Compound 4的C-1位糖基而言，可能因其較大的空間位阻使得Compound 4的活性發(fā)生了明顯下降。

5、r>　　 此外，本研究對(duì)上述四種化合物中抗癌活性最強(qiáng)的化合物Compound 2的抗癌機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。其中形態(tài)學(xué)觀察及臺(tái)盼藍(lán)排染法結(jié)果顯示，當(dāng)?shù)蜐舛鹊腃ompound 2 (12.4 to 74.4μg/ml)處理HL-60細(xì)胞后，細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間劑量依賴性生長(zhǎng)抑制。流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，不同濃度Compound 2能夠分別使細(xì)胞阻滯在G1期及G2/M期。AO/EB雙染實(shí)驗(yàn)，DNA瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)分析實(shí)驗(yàn)的

6、結(jié)果顯示，高濃度的Compound 2 (82.7 to 330.8μg/ml)能夠誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞發(fā)生明顯的凋亡現(xiàn)象。另外，彗星電泳結(jié)果顯示，Compound 2對(duì)HL-60細(xì)胞具有較強(qiáng)的DNA損傷作用。簡(jiǎn)言之，所有結(jié)果表明，Compound 2對(duì)HL-60細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒性，能夠誘導(dǎo)該細(xì)胞發(fā)生時(shí)間和劑量依賴性的生長(zhǎng)抑制及細(xì)胞凋亡。其可能的抗癌作用機(jī)制為Compound 2引起了HL-60細(xì)胞不同程度的DNA損傷，從而使低濃度C