外傷性癲癇大鼠海馬CA3區(qū)膠質(zhì)增生的可能途徑及抗氧化劑Edaravone的影響.pdf

1、目的：1.通過觀察外傷性癲癇(Posttraumatic Epilepsy，PTE)大鼠模型海馬CA3區(qū)nestin、核因子-kB(NF-kB)及膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的動態(tài)表達，了解PTE后該區(qū)域氧化應(yīng)激反應(yīng)情況及神經(jīng)干細胞(Neural stem cells，NSCs)、膠質(zhì)細胞動態(tài)變化情況。
　　 2.觀察神經(jīng)干細胞特異性指標(biāo)CD133的動態(tài)變化，并與膠質(zhì)細胞相關(guān)指標(biāo)行免疫組化雙標(biāo)染色，進一步闡明PTE后膠質(zhì)細胞增生

2、的可能途徑。
　　 3.以新型抗氧化劑edaravone對以上途徑進行干預(yù)，并對照比較CD133、NF-kB及GFAP的表達變化，探討PTE可能的防治機制。
　　 方法：1.健康成年雄性SD大鼠29只，采用隨機數(shù)字表法分為鹽水對照組和癲癇模型組。通過皮層注射氯化亞鐵(0.1mol/L，10uL)制作PTE模型。觀察行為學(xué)、腦電圖，在不同時間點取腦，分別行抗NF-kB、nestin及GFAP酶標(biāo)免疫組織化學(xué)染色，借助專業(yè)圖

3、像分析軟件，對海馬CA3區(qū)行病理學(xué)觀察。
　　 2.進一步行神經(jīng)干細胞特異性抗體CD133免疫組化染色，以及CD133/NF-kB和GFAP/NF-kB免疫組化雙標(biāo)染色，觀察膠質(zhì)細胞與神經(jīng)干細胞共表達的變化趨勢。
　　 3.健康成年雄性SD大鼠36只，采用隨機數(shù)字表法分為正常組、對照組和治療組。治療組制模成功后腹腔內(nèi)注射edaravone(3mg/kg)，觀察行為學(xué)、腦電圖，在不同時間點取腦，行抗NF-kB、CD133及

4、GFAP免疫組化染色，觀察抗氧化劑對PTE后海馬病理重構(gòu)的影響。
　　 結(jié)果：1.共制模成功17只，其中于制模后1～3h間因癲癇持續(xù)狀態(tài)后窒息死亡2只，成功存活15只，制模成功率88.24％。癲癇模型組海馬CA3區(qū)nestin表達在1d后逐漸增加，7d時表達最強，14d時降低；NF-kB在1d時大量表達，7d后減少，14d明顯減少；GFAP在7d表達增強，14d時最多，各組之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　

5、2.癲癇模型組1d后CD133表達增強，7d最強，14d降低；CD133/NF-kB雙標(biāo)染色1d開始有表達，7d時表達增強，14d陽性細胞減少，均未見共表達陽性細胞；GFAP/NF-kB雙標(biāo)染色隨時間推移逐漸增強，14d時雙標(biāo)染色共表達陽性細胞最多。
　　 3.Edaravone治療組CD133、GFAP及NF-kB表達較同一時期正常組和對照組相關(guān)指標(biāo)的表達弱，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1.皮層注

6、射氯化亞鐵(0.1mol/L，10uL)后，可通過某些機制，誘導(dǎo)海馬神經(jīng)前體細胞的增殖分化，或者誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)細胞自身增殖/增生，可能在該模型晚期PTE的發(fā)病機制中起作用。
　　 2.皮層注射氯化亞鐵誘導(dǎo)的大鼠PTE存在NSCs分化以及自身膠質(zhì)細胞增殖兩種途徑共同導(dǎo)致海馬膠質(zhì)細胞增多。
　　 3.該模型PTE后的反應(yīng)可造成海馬結(jié)構(gòu)紊亂。Edaravone可能抑制這一海馬病理重構(gòu)過程，從而在該模型晚期PTE的防治中起重要作用