PDCD5蛋白在人類前列腺癌組織中的表達及其與雄激素受體表達的相關性研究.pdf

1、研究背景： 目前在美國前列腺癌（PCa）的發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤。我國仍屬于PCa的低危國家，但由于經(jīng)濟發(fā)展帶來的飲食結構西方化、預期壽命延長等暴露因素的改變，近年來國內部分發(fā)達地區(qū)的PCa發(fā)病率迅速升高。 研究結果顯示，關于細胞凋亡在PCa演變過程中的作用目前尚難定論，PCa細胞凋亡的局部調控機制可能遠較我們的預期要更為復雜。盡管具體效應總說紛紜，但細胞凋亡與PCa的發(fā)生、發(fā)展以及治療效應的產(chǎn)

2、生均有密切關系，在基因及其產(chǎn)物等不同水平闡明凋亡調控因子在PCa組織中的表達及其意義有助于PCa診療水平的不斷提高。 PDCD5(programmedcelldeath5)是北京大學人類疾病基因中心1999年在國際上首先報道的一個凋亡誘導基因。體外實驗表明，PDCD5在宮頸癌、卵巢癌、肝癌等多種腫瘤細胞系中均可促進腫瘤細胞發(fā)生凋亡，并對放、化療起協(xié)同作用。近年來，我們在國內外最先將PDCD5引入泌尿生殖系腫瘤發(fā)病機制的研究。應用

3、免疫組化的方法首次檢測了癌旁正常腎組織及腎透明細胞癌組織中PDCD5的表達，結果顯示PDCD5在腎小管上皮細胞內表達較強，而在腎透明細胞癌組織中的表達則明顯降低，并且隨著腎腫瘤分期的上升以及惡性程度的增加，PDCD5的表達呈下降的趨勢，說明PDCD5可能在不同程度上參與了腎癌發(fā)生、發(fā)展過程中的細胞凋亡調控。目前，對PDCD5的研究多局限于實驗室階段，迄今為止尚無在臨床階段對PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織中的表達情況進行研究的

4、報道。 目的： 通過免疫組化方法探究PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織中的表達特點，并對AR與PDCD5在PCa組織中表達的相關性進行研究，進而求證PDCD5通過調控細胞凋亡參與PCa發(fā)生、發(fā)展進程的可能性，以期篩選具有較好臨床實用價值的PCa預后評估指標，并為在基因水平上進行PCa的防治尋找新的有效靶點。 材料與方法： PCa組織標本22例均來源于近期在我院及外院行前列腺癌根治術患者，切片行病理

5、證實后，參照Gleason分級標準，低危組11例(Gleason評分≤6)，中危組3例(Gleason評分=7)，高危組8例(Gleason評分≥8)。有6例外院標本臨床資料欠缺，其余16例年齡58-71歲，平均65.1歲；血清PSA22.5ng／ml～276.8ng／ml，平均67.6ng／ml；按照臨床分期，T1c期5例、T2a期3例、T2b期4例、T2c期3例、T3b期1例。所有患者術前均未接受放療、化療及內分泌治療。BPH組織標

6、本22例，取材于2007年1月至2007年9月在我院接受TURP或恥骨上前列腺摘除術的部分BPH患者，年齡61-78歲，平均69.7歲。12例正常前列腺組織標本取材于非泌尿系疾病致死行尸檢者，年齡21-36歲，平均28.3歲。 首先，采用EnVision法對正常前列腺、BPH及不同病理分級的PCa組織切片進行PDCD5的免疫組化染色，用已知宮頸上皮細胞切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，采用人工閱片評分及計算機輔助染色強度

7、判定2種方法對PDCD5在相應組織中的表達進行定性及定量分析。 隨后，仍然應用EnVision法對22例PCa組織的AR表達進行檢測，用已知陽性的BPH切片作AR陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。根據(jù)定性分析結果PCa組分為AR(+)及AR(-)兩個亞組，對PDCD5在AR(+)／(-)兩組PCa標本間表達的差異性進行比較。 所有統(tǒng)計學分析過程均采用SPSS10.O統(tǒng)計軟件實現(xiàn)，以P<0.05表示差異具有顯著性。正常前

8、列腺、BPH及不同病理分級PCa組織PDCD5表達的比較采用多個獨立樣本比較的秩和檢驗(KruskalwallisTest)、PCa組織中AR與PDCD5表達的相關性分析采用兩獨立樣本比較的秩和檢驗(Mann-whitneyTest)、AR在不同病理分級PCa組織中表達的比較采用配對計數(shù)資料的x2檢驗及一致性檢驗進行分析(McNemartestandMeasureofAgreementKappa)，對于理論頻數(shù)較小者取校正后p值；正常前

9、列腺、BPH及不同病理分級PCa組織PDCD5染色平均光密度值(mOD)的比較采用單向方差分析(One-WayANOVA)，進一步的組間比較采用LSD法：PCa組織中AR表達與PDCD5的平均光密度值分析采用獨立樣本t檢驗(Independent-SampleTTest)。 結果： 1.PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織的表達 PDCD5蛋白主要在PCa組織的腺上皮呈胞漿著色，也可部分著色子細胞核。由于中

10、危組(Glesaon評分=7)Pca僅有3例，因此將其與低危組(Glesaon評分≤6)Pca合并為中低危組(Glesaon評分≤7)Pca，與高危組(Glesaon評分>7)Pca、正常前列腺組及BPH組進行比較。統(tǒng)計學分析表明，正常前列腺與BPH組織中PDCD5表達無顯著性差異(p=1.000)。中低危組及高危組Pca組織中PDCD5表達與正常前列腺與BPH均存在顯著性差異(中低危組vs正常前列腺，p=0.001；中低危組vsBPH

11、，p=0.001；高危組vs正常前列腺，p=0.000；高危組vsBPH，p=0.000)，并且兩組間PDCD5表達亦存在顯著性差異(p=0.019)。 統(tǒng)計學分析結果提示PDCD5在PCa組織中的表達較正常組織及BPH均有顯著下降，隨著PCa惡性程度上升，PDCD5的表達進一步下調。 2.PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織中的平均光密度值分析 統(tǒng)計學分析表明，正常前列腺與BPH組織中PDCD5染色強度比

12、較無顯著性差異(p=0.290)。中低危組及高危組Pca組織中PDCD5染色強度與正常前列腺與BPH均存在顯著性差異(中低危組vs正常前列腺，p=0.000；中低危組vsBPH，p=0.001；高危組vs正常前列腺，p=0.000；高危組vsBPH，p=0.000)，此外，兩組間PDCD5染色強度亦存在顯著性差異(p=0.014)。 PDCD5免疫組化染色定量分析與前述半定量分析的統(tǒng)計學結果高度吻合，進一步提示了PDCD5表達下

13、調與前列腺癌變及其惡性程度的相關性。 3.PCa組織中AR與PDCD5表達的相關性分析 AR在前列腺組織中表達于上皮細胞核內，呈淺棕色或棕褐色染色。在總計22例PCa組織標本中，有13例呈AR表達陽性，9例AR表達陰性 對PDCD5在AR(+)及AR(-)兩組間PCa組織中的表達進行統(tǒng)計學分析，校正后p值為0.060，結果表明兩者間比較無顯著性差異。 4.PEa組織中AR表達與PDCD5的平均光密度值分析

14、 統(tǒng)計學分析顯示，前列腺癌AR(+)及AR(-)兩組間PDCD5染色強度存在顯著性差異(p=0.006)，與前述定性分析的統(tǒng)計學結果不同，PDCD5免疫組化染色定量分析提示PDCD5在前列腺癌AR(+)組中表達要明顯強于AR(-)組。 5.AR在不同病理分級PCa組織中的表達 對AR在中低危組與高危組PCa組織中的的表達進行統(tǒng)計學分析，McNemar檢驗及一致性檢驗的校正后p值為分別為1.000及0.187，結果

15、表明兩者間的差異性及吻合度均無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.PDCD5在正常前列腺及BPH組織中均呈較強的陽性表達，但兩者對比并無顯著差異。 2.PDCD5在PCa組織中的表達較正常組織及BPH均有顯著下降，并且隨著PCa惡性程度上升，PDCD5的表達進一步下調，提示PDCD5可能在不同程度上參與了PCa發(fā)生、發(fā)展過程中腺細胞凋亡的調控。 3.PDCD5在前列腺癌AR(-)組中的表達要弱于AR(+)組，提示A