蘋(píng)果梨雜交后代單株的RAPD分析.pdf

1、本研究以紅金秋、延光梨等6個(gè)梨屬及紅金秋×蘋(píng)果梨(論文中將供試用的紅金秋×蘋(píng)果梨雜交單株21株簡(jiǎn)稱(chēng)為1號(hào)～21號(hào))的F<,1>代雜種群體21株為試材，應(yīng)用RAPD技術(shù)，對(duì)其進(jìn)行了品種鑒定和分類(lèi)地位的研究。結(jié)果表明： 采用改良CTAB法在提取部分梨基因組DNA過(guò)程中表現(xiàn)最好且純度最高：SDS-CTAB法存在大量的降解片段，DNA的獲得率不高；經(jīng)顯著性方差分析，采用改良SDS法提取的各梨品種DNA產(chǎn)率均顯著優(yōu)于其他方法，但純度較低：

2、高鹽低pH值法產(chǎn)率和純度均最低且完整性均不理想。本實(shí)驗(yàn)最終采用CTAB改良法快速提取到了較高質(zhì)量蘋(píng)果梨雜交后代基因組總DNA用于RAPD擴(kuò)增，并在RAPD反應(yīng)中篩選出17個(gè)10堿基隨機(jī)引物，它們的多態(tài)性百分率大多在76.07％以上。確定了RAPD-PCR蘋(píng)果梨雜交后代最適反應(yīng)體系為：總反應(yīng)體系為25ul，其中模板DNA濃度為135ng/μl，引物濃度為15pmol，dNTP濃度為1.5mmol/L，Mg<'2+>濃度為1.5mmol/L

3、及Taq DNA聚合酶濃度為1.0 u，其余用重蒸餾水補(bǔ)充。擴(kuò)增程序?yàn)椋侯A(yù)變性94℃5min，變性94℃1min，退火溫度40℃1min，延伸72℃1.5min，共40個(gè)循環(huán)：72℃最終延伸5min。 建立了27個(gè)樣品的指紋圖譜。找到了4個(gè)樣品的特征標(biāo)記。27個(gè)樣品中的20個(gè)樣品可以用一個(gè)引物的兩條帶和其它樣品區(qū)分開(kāi)。 對(duì)供試蘋(píng)果梨雜交后代及其相關(guān)品種27株進(jìn)行了RAPD擴(kuò)增，根據(jù)遺傳距離進(jìn)行了聚類(lèi)分析，以遺傳距離0.3

4、0為結(jié)合線，將供試樣品分成了5類(lèi)。27個(gè)樣品的遺傳距離范圍在0.10～0.46之間，以遺傳距離0.30為結(jié)合線，將供試樣品分成了5類(lèi)：第一類(lèi)全部是蘋(píng)果梨雜交后代，包括：紅×蘋(píng)2號(hào)、3號(hào)、5～21號(hào)，共19個(gè)單株；第二類(lèi)包括紅金秋、紅×蘋(píng)1號(hào)、4號(hào)、蘋(píng)果梨，說(shuō)明紅×蘋(píng)l號(hào)和4號(hào)與蘋(píng)果梨親緣關(guān)系最近，繼承蘋(píng)果梨的基因較多，其他雜交后代繼承紅金秋的基因較多；紅金秋是大香水和蘋(píng)果梨的雜交后代，從圖11中看出紅金秋與蘋(píng)果梨關(guān)系較近，說(shuō)明紅金秋本身