鼻腔給予睪桐-丙酸睪丸酮對(duì)大鼠行為的影響及其機(jī)制.pdf

1、衰老過程中男性個(gè)體雄激素水平多呈現(xiàn)不同程度的降低，其運(yùn)動(dòng)及探索行為逐漸減弱、老年后常表現(xiàn)出平衡及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)的障礙。研究發(fā)現(xiàn)雄激素參與某些神經(jīng)精神疾病的神經(jīng)病理生理改變。伴有睪酮缺乏的帕金森病患者在睪酮替代治療后，其靜止性震顫及精細(xì)運(yùn)動(dòng)調(diào)控均得到顯著改善，而且帕金森病運(yùn)動(dòng)癥狀的改善程度與血清睪酮水平有關(guān)；帕金森病患者皮下埋置睪酮能夠緩解與睪酮缺乏相似的帕金森病非運(yùn)動(dòng)癥狀。
　　 目前針對(duì)睪酮缺乏所致相關(guān)疾病的睪酮替代治療主要采用口服

2、、肌肉注射及皮下植入（埋置）緩釋囊等方法。但這些給藥途徑存在一定的缺點(diǎn)，口服睪酮制劑常因首過效應(yīng)而降低睪酮的生物利用度；肌肉注射存在一定的傷害，會(huì)造成病人的一定痛苦，特別是需長(zhǎng)期的睪酮替代治療時(shí)；植入或皮下埋植法患者須經(jīng)歷小的手術(shù)創(chuàng)傷，且常發(fā)生植入緩釋囊的膨出或因皮下植入非囊性斑塊制劑導(dǎo)致患者的皮膚刺激癥狀。
　　 理想的睪酮替代治療應(yīng)提供安全、有效、經(jīng)濟(jì)、方便、劑量容易掌握且容易達(dá)到有效的血液生物利用度；如果期望睪酮作用于腦，

3、改善腦的功能活動(dòng)，則期望睪酮進(jìn)入腦的同時(shí)，不引起或較少引起周圍的副作用。
　　 作為呼吸系統(tǒng)一部分的鼻腔其被覆粘膜包括呼吸部和嗅部?jī)刹糠?。嗅部的嗅?xì)胞屬神經(jīng)細(xì)胞則通過嗅絲與顱內(nèi)的嗅腦相聯(lián)系。由于鼻腔的粘膜特性，經(jīng)鼻途徑也成為近年某些藥物制劑首選的給藥方法。
　　 因此，本研究以健康雄性、去勢(shì)（雄激素缺乏）及老年雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，通過分析大鼠行為的變化，探討鼻腔給予雄激素對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，并通過免疫細(xì)胞化學(xué)、

4、免疫印跡以及高效液相色譜法探討與行為密切相關(guān)的中腦多巴胺能神經(jīng)元及5-HT能神經(jīng)元所發(fā)揮的作用，期望所獲結(jié)果為以鼻腔給予睪酮(Testosterone，T)或丙酸睪丸酮(Testosterone propionate，TP)治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 第一部分：鼻腔給予T/TP對(duì)大鼠相關(guān)腦區(qū)c-Fos表達(dá)的影響
　　 目的：探討鼻腔給予T/TP是否能夠引起大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)c-Fos的表達(dá)、激活不同的腦區(qū)

5、。
　　 方法：利用放射免疫分析法檢測(cè)大鼠鼻腔給予TP后腦脊液和血清睪酮濃度的變化；以免疫細(xì)胞化學(xué)方法顯示大鼠各腦區(qū)c-Fos的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1．放射免疫分析法結(jié)果顯示：去勢(shì)組大鼠腦脊液和血清中睪酮含量比正常組分別降低了45％(P＜0.01)和69％(P＜0.01)；去勢(shì)大鼠皮下注射TP后只增加了血清中睪酮的含量；去勢(shì)大鼠鼻腔給予TP后腦脊液和血清中睪酮的含量均明顯增加，腦脊液中睪酮的含量明顯高于去勢(shì)皮下注射TP組

6、(GDX-sc．TP)（P＜0.01），而血清中的含量明顯低于GDX-sc.TP組(P＜0.05)；與Intact組大鼠相比，正常大鼠鼻腔給予TP后也顯著增加腦脊液和血清中睪酮的含量。2．免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：正常大鼠鼻腔給予TP或T增加嗅結(jié)節(jié)(Olfactory tubercle，Tu)、邊緣前皮質(zhì)(Prelimbic cortex，PrL)、運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)(Motor cortex，M1，M2)、扣帶回(Cingulate cortex，

7、Cg)、尾殼核背內(nèi)側(cè)(Dorsomedial caudate putamen，CPu-DM)、尾殼核背外側(cè)（Dorsolateral caudate putamen，CPu-DL）、伏核(Accumbens nucleus，Acb)、下丘腦后區(qū)(Posterior hypothalamic area，PH)、黑質(zhì)外側(cè)部(Substantia nigra，lateral part，SNL)、中縫背核(Dorsal raphe nucleu

8、s，DR)的c-Fos免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元數(shù)目和嗅球(Olfactory bulb, OB)、Tu、PrL、M1、M2、Cg、CPu-DM、CPu-DL、Acb、海馬（Hippocampus，HIP）、PH、SNL和DR的c-Fos免疫反應(yīng)強(qiáng)度，而皮下注射TP只增加了Tu、PrL、CPu-DL和Acb腦區(qū)c-Fos免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元數(shù)目以及OB和Tu腦區(qū)的c-Fos免疫反應(yīng)強(qiáng)度。
　　 結(jié)論：1．雄性大鼠去勢(shì)后腦脊液和血清中睪酮的

9、濃度明顯降低；去勢(shì)大鼠皮下注射TP僅增加血清中睪酮的濃度；去勢(shì)大鼠和正常大鼠鼻腔給予TP后均能夠增加腦脊液和血清中睪酮的濃度。2．皮下注射TP僅激活了少數(shù)腦區(qū)c-Fos蛋白的表達(dá)；鼻腔給予TP或T后能夠激活多數(shù)腦區(qū)c-Fos蛋白的表達(dá)。
　　 第二部分：鼻腔給予睪酮改變大鼠的曠場(chǎng)行為
　　 目的：觀察大鼠長(zhǎng)期鼻腔給予睪酮后的曠場(chǎng)行為變化，推測(cè)鼻腔給予睪酮對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響。
　　 方法：通過曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察大鼠鼻腔

10、給予睪酮后靜止聞嗅行為、探索行為、趨觸性行為、運(yùn)動(dòng)行為和理毛行為的變化。
　　 結(jié)果：1．正常大鼠鼻腔給予睪酮后靜止聞嗅次數(shù)比intact增加了46％(P＜0.01)。雄性大鼠去勢(shì)后靜止聞嗅次數(shù)比sham組顯著降低44％(P＜0.01)，去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后明顯增加靜止聞嗅次數(shù)(P＜0.01)，并且超過sham組水平88％(P＜0.01)。2．正常大鼠大鼠鼻腔給予睪酮后walking、climbing、rearing和snif

11、fing行為次數(shù)比intact組分別增加了82％(P＜0.01)、54％(P＜0.05)、85％(P＜0.01)和65％(P＜0.01)。雄性大鼠去勢(shì)后四種行為次數(shù)比sham組分別降低了70％（P＜0.01）、57％(P＜0.01)、68％(P＜0.01)和62％（P＜0.01）；去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后能夠恢復(fù)walking、climbing和sniffing三種行為到sham組水平，而Rearing的次數(shù)盡管比GDX組增加了68％（P

12、＞0.05），仍比sham組低47％（P＜0.05）。3．正常大鼠鼻腔給予睪酮后垂直運(yùn)動(dòng)、水平運(yùn)動(dòng)和總徑長(zhǎng)比intact組分別增加了61％(P＜0.01)、69％(P＜0.05)和75％(P＜0.01)。雄性大鼠去勢(shì)后三種行為數(shù)量比sham組分別降低了60％(P＜0.01)、60％(P＜0.01）和59％(P＜0.01)；去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后能夠恢復(fù)三種行為到sham組水平。4．正常組大鼠鼻腔給予睪酮后理毛數(shù)量和理毛持續(xù)時(shí)間比inta

13、ct組分別增加了72％(P＜0.01)和61％(P＜0.01)。雄性大鼠去勢(shì)后理毛數(shù)量和理毛持續(xù)時(shí)間比sham組分別降低了54％(P＜0.01)和55％（P＜0.01），去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后理毛數(shù)量和理毛持續(xù)時(shí)間恢復(fù)到sham組水平。5．去勢(shì)大鼠皮下注射睪酮后只恢復(fù)了walking、水平運(yùn)動(dòng)和總徑長(zhǎng)到假手術(shù)皮下注射安慰劑(sham-sc)水平。
　　 結(jié)論：1．去勢(shì)降低雄性大鼠的曠場(chǎng)行為。2．長(zhǎng)期鼻腔給予睪酮增加正常大鼠和去勢(shì)

14、大鼠的曠場(chǎng)行為。3．鼻腔給予睪酮改善去勢(shì)大鼠曠場(chǎng)行為的效果明顯優(yōu)于皮下注射。
　　 第三部分：鼻腔給予睪酮增加大鼠黑質(zhì)-尾殼核、腹側(cè)被蓋區(qū)-伏核DA能神經(jīng)元的功能活動(dòng)
　　 目的：探討長(zhǎng)期鼻腔給予睪酮對(duì)黑質(zhì)-尾殼核、腹側(cè)被蓋區(qū)-伏核DA能神經(jīng)元的影響。
　　 方法：通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法和免疫印記方法顯示酪氨酸羥化酶(TH)和多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)的表達(dá)；利用HPLC法檢測(cè)DA及其代謝產(chǎn)物二羥基苯乙酸(DOPAC)

15、和高香草酸(HVA)的含量。
　　 結(jié)果：1．免疫細(xì)胞化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)：1）正常大鼠鼻腔給予睪酮后SN的TH表達(dá)比intact組增加7％(P＜0.05)、CPu的DM、VM、VL和DL四個(gè)亞群分別增加了27％(P＜0.01)、30％(P＜0.01)、17％(P＜0.01)和18％(P＜0.01)、VTA增加了5％（P＜0.05）、Acb的Core和Shell兩個(gè)亞群分別增加了18％(P＜0.01)和15％(P＜0.01)；雄性大鼠去

16、勢(shì)后SN的TH表達(dá)比sham組降低13％(P＜0.05)、CPu的DM、VM、VL和DL四個(gè)亞群分別降低18％(P＜0.05)、16％(P＜0.05)、11％(P＜0.05)和14％(P＜0.05)，VTA降低了26％(P＜0.05)、Acb的Core和Shell兩個(gè)亞群分別降低17％(P＜0.01)和16％(P＜0.05)；去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后恢復(fù)上述腦區(qū)TH的表達(dá)到sham組水平，其中Acb的Core亞群TH的表達(dá)超過sham組水

17、平(P＜0.01)。2）正常大鼠鼻腔給予睪酮SN的DAT表達(dá)比intact組增加7％(P＜0.01)、CPu的DM、VM、VL和DL四個(gè)亞群分別增加了27％(P＜0.01)、23％(P＜0.05)、43％(P＜0.01)和22％(P＜0.05)、VTA增加了10％(P＜0.01)、Acb的Core和Shell兩個(gè)亞群分別增加了21％(P＜0.01)和13％（P＜0.05）：雄性大鼠去勢(shì)后SN的DAT表達(dá)比sham組降低13％(P＜0.0

18、1)、CPu的DM、VM、VL和DL四個(gè)亞群分別降低15％(P＜0.05)、16％(P＜0.05)、15％(P＜0.05)和15％(P＜0.01)、VTA降低了15％(P＜0.05)、Acb的Core和Shell兩個(gè)亞群分別降低18％(P＜0.01)和17％(P＜0.05)；去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后恢復(fù)上述腦區(qū)DAT的表達(dá)到sham組水平。3）去勢(shì)大鼠皮下注射睪酮后只恢復(fù)了SN和VTA的DAT表達(dá)。2．免疫印記方法發(fā)現(xiàn)：1）正常大鼠鼻腔給

19、予睪酮后SN、CPu、VTA和Acb腦區(qū)TH的表達(dá)比intact組分別增加123％(P＜0.01)、8％(P＜0.01)，27％(P＜0.01)和51％(P＜0.01)；雄性大鼠去勢(shì)后上述四個(gè)腦區(qū)TH的表達(dá)比sham組分別降低39％(P＜0.01)、11％(P＜0.01)、35％(P＜0.01)和43％(P＜0.01)；勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后增加了上述腦區(qū)TH的表達(dá)。2)DAT的表達(dá)顯示兩個(gè)條帶，一條位于80KDa處為成熟糖基化DAT(G

20、lycosylated-DAT)，另一條位于50KDa處為未成熟的非糖基化DAT(Non-Glycosylated-DAT)。正常大鼠鼻腔給予睪酮增加了SN兩種DAT的表達(dá)比intact組分別增加了14％(P＜0.01)和10％(P＜0.01)、 CPu分別增加了40％(P＜0.01)和11％(P＜0.01)、Acb分別增加了22％（P＜0.01）和10％(P＜0.05)、VTA糖基化DAT增加了53％(P＜0.01)；雄性大鼠去勢(shì)后S

21、N兩種DAT的表達(dá)比sham組分別降低了20％(P＜0.01)和23％(P＜0.01)、VTA分別降低了58％(P＜0.01)和23％(P＜0.01)、Acb分別降低了51％(P＜0.01)和17％(P＜0.01)、CPu非糖基化DAT降低了12％(P＜0.05)；去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后增加了上述腦區(qū)降低的兩種DAT的表達(dá)。3）去勢(shì)大鼠皮下注射睪酮后只增加了SN的TH(P＜0.01)、CPu糖基化DAT(P＜0.01)和非糖基化DAT(

22、P＜0.01)的表達(dá)。3．HPLC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，正常大鼠鼻腔給予睪酮后SN和CPu的DA含量無明顯變化(P＞0.05)，CPu的DOPAC和HVA的含量以及DOPAC+HVA/DA的比值比Intact組分別增加了38％(P＜0.01)、60％(P＜0.01)和35％(P＜0.05)；雄性大鼠去勢(shì)后SN和CPu的DA含量，CPu的DA代謝產(chǎn)物和代謝率無明顯變化(P＞0.05)，去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后CPu的HVA的含量比GDX組增加了23％(

23、P＜0.05)，DOPAC和HVA的含量分別超過Sham組水平的18％(P＜0.01)和51％(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：1．大鼠去勢(shì)顯著降低了大鼠SN、VTA、CPu和Acb四個(gè)腦區(qū)TH和DAT的表達(dá)。2．長(zhǎng)期鼻腔給予睪酮能夠增加正常大鼠和去勢(shì)大鼠SN、VTA、CPu和Acb四個(gè)腦區(qū)TH和DAT的表達(dá)，增加了DA能神經(jīng)元的代謝。3．睪酮改善去勢(shì)所致中腦DA能神經(jīng)元功能活動(dòng)降低的效果，鼻腔途徑優(yōu)于皮下注射。
　　 第

24、四部分：鼻腔給予睪酮增加大鼠中腦5-羥色胺能神經(jīng)元的功能活動(dòng)
　　 目的：探討長(zhǎng)期鼻腔給予睪酮對(duì)中縫背核(DR)5-HT能神經(jīng)元的影響。
　　 方法：以免疫細(xì)胞化學(xué)方法顯示大鼠中縫背核TPH、5-HT和SERT的表達(dá)；利用HPLC方法檢測(cè)DR、CPu和Acb腦區(qū)5-HT及其代謝產(chǎn)物五羥吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。
　　 結(jié)果：1．免疫細(xì)胞化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)：1）正常大鼠鼻腔給予睪酮后中縫背核TPH、5-HT和SER

25、T的表達(dá)比intact組分別增加3％(P＜0.05)、9％（P＜0.05）和15％(P＜0.01)；雄性大鼠去勢(shì)后DR上述三種物質(zhì)的表達(dá)比sham組分別降低21％(P＜0.01)、22％(P＜0.01)和29％（P＜0.05）；去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后恢復(fù)DR的TPH、5-HT和SERT表達(dá)至sham組水平，其中SERT的表達(dá)超過sham組水平（P＜0.05）。2)去勢(shì)大鼠皮下注射睪酮后增加了TPH、5-HT和SERT的表達(dá)，但仍低于sh

26、am-sc組水平。2．HPLC法發(fā)現(xiàn)：正常大鼠鼻腔給予睪酮后DR的5-HT含量比intact組增加32％(P＜0.01)，CPu的5-HIAA和5-HIAA/5-HT比值分別增加了27％(P＜0.05)和26％(P＜0.05)，Acb的5-HIAA和5-HIAA/5-HT比值分別增加了29％(P＜0.05)和28％(P＜0.05)；雄性大鼠去勢(shì)后DR、CPu和Acb的5-HT含量比Sham組分別降低了26％(P＜0.05)、26％(P＜

27、0.05)和12％(P＜0.05)，CPu和Acb的5-HIAA含量分別降低了13％(P＜0.05)和23％(P＜0.05);去勢(shì)大鼠鼻腔給予睪酮后能夠恢復(fù)上述腦區(qū)各指標(biāo)到sham組水平。
　　 結(jié)論：1．去勢(shì)降低雄性大鼠中縫背核TPH、5-HT和SERT的表達(dá)。2．長(zhǎng)期鼻腔給予睪酮增加大鼠中縫背核TPH、5-HT和SERT的表達(dá)，其效果優(yōu)于皮下注射。3．去勢(shì)降低雄性大鼠DR、CPu和Acb的5-HT及其代謝產(chǎn)物的含量，長(zhǎng)期鼻腔

28、給予睪酮逆轉(zhuǎn)上述改變。
　　 第五部分：鼻腔給予丙酸睪丸酮對(duì)老年大鼠行為及其腦內(nèi)DA和5-HT能神經(jīng)元的影響
　　 目的：觀察長(zhǎng)期鼻腔給予TP后老年大鼠曠場(chǎng)行為、平衡反應(yīng)能力、肌張力和運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力的變化，以及對(duì)腦內(nèi)DA和5-HT能神經(jīng)元的影響，期望所獲結(jié)果為鼻腔給予睪酮（或TP）治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：利用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、傾斜面實(shí)驗(yàn)、水平繩實(shí)驗(yàn)和粘附物去除實(shí)驗(yàn)觀察大鼠的行為；以免疫細(xì)胞化學(xué)和

29、免疫印跡顯示TH、DAT、TPH、5-HT、SERT的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1．曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，老年24月齡大鼠的靜止聞嗅次數(shù)、Walking、Climbing、Rearing、Sniffing、垂直運(yùn)動(dòng)、水平運(yùn)動(dòng)、總徑長(zhǎng)、理毛數(shù)量和理毛持續(xù)時(shí)間比6Mon組分別降低了39％(P＜0.01)、55％(P＜0.01)、39％(P＜0.01)、74％(P＜0.01)、53％(P＜0.01)、53％(P＜0.05)、58％(P＜0.01)、

30、58％(P＜0.01)、56％(P＜0.01)和57％(P＜0.01)，理毛潛伏期比6Mon組延長(zhǎng)了506％(P＜0.01);老年大鼠長(zhǎng)期鼻腔給予TP后能夠增加或恢復(fù)上述降低的行為，縮短理毛潛伏期時(shí)間。2．傾斜面實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，老年24月齡大鼠的傾斜面下滑角度比6月齡組降低了27％(P＜0.05)，50°夾角滑下次數(shù)增加了660％(P＜0.01)；老年大鼠鼻腔給予TP后，增加了傾斜面下滑的角度，減少了50°角滑下次數(shù)。3．水平繩實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，老年

31、24月齡大鼠的懸掛時(shí)間比6月齡大鼠縮短69％(P＜0.01)；老年大鼠鼻腔給予TP后延長(zhǎng)了懸掛時(shí)間。4．粘附物去除實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，老年24月齡大鼠的左鼻和右鼻粘附物去除時(shí)間比6月齡大鼠分別延長(zhǎng)了435％(P＜0.05)和656％(P＜0.05)；老年大鼠鼻腔給予TP后左鼻和右鼻粘附物去除時(shí)間恢復(fù)到6月齡大鼠水平。5．免疫細(xì)胞化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)：1）老年24月齡大鼠SN的TH表達(dá)比6月齡組降低了22％(P＜0.05)、CPu的DM、VM、VL和DL四

32、個(gè)亞群分別降低21％(P＜0.05)、25％(P＜0.05)、20％(P＜0.05)和24％(P＜0.01)、VTA降低了12％(P＜0.05)、Acb的Core和Shell兩個(gè)亞群分別降低20％(P＜0.05)和15％(P＜0.01)，老年大鼠鼻腔給予TP后增加了上述腦區(qū)TH的表達(dá)。2）老年24月齡大鼠SN的DAT表達(dá)比6月齡組降低了10％(P＜0.05)、CPu的DM、VM、VL和DL四個(gè)亞群分別降低17％(P＜0.05)、16％(

33、P＜0.05)、15％(P＜0.05)和17％(P＜0.05)、VTA降低了9％（P＜0.05）、Acb的Core和Shell兩個(gè)亞群分別降低19％（P＜0.05）和17％（P＜0.01）；老年大鼠鼻腔給予TP后增加了SN、CPu的DM、VL和DL三個(gè)亞群，VTA和Acb的Shell亞群DAT的表達(dá)。3)老年24月齡大鼠DR的TPH、5-HT和SERT表達(dá)比6月齡組分別降低10％(P＜0.05)、14％(P＜0.01)和12％(P＜0.

34、01)；老年大鼠鼻腔給予TP后增加TPH、5-HT和SERT的表達(dá)。6．免疫印記方法發(fā)現(xiàn)：1）老年24月齡大鼠SN、CPu、VTA和Acb四個(gè)腦區(qū)TH的表達(dá)比6月齡大鼠分別降低25％(P＜0.01)、18％(P＜0.01)、41％(P＜0.01)和24％(P＜0.01)；老年大鼠鼻腔給予TP后增加了上述腦區(qū)TH的表達(dá)。2）老年24月齡大鼠SN的糖基化DAT和非糖基化DAT的表達(dá)比6月齡大鼠分別降低10％(P＜0.05)和40％(P＜0.

35、01)、CPu分別降低了36％(P＜0.01)和16％（P＜0.05）、VTA分別降低了70％(P＜0.01)和10％(P＜0.05)、Acb分別降低了12％(P＜0.05)和14％(P＜0.01)；老年大鼠鼻腔給予TP后SN、CPu和VTA非糖基化的DAT恢復(fù)到6Mon組水平。
　　 結(jié)論：1.24月齡大鼠的曠場(chǎng)行為、平衡反應(yīng)能力、肌張力和運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力比6月齡明顯降低；老年大鼠長(zhǎng)期鼻腔給予TP后能夠改善上述行為障礙。2.24月