系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細胞亞型及其脂筏表達模式的研究.pdf

1、目的：
　　1.了解SLE患者外周血B淋巴細胞亞型表達模式及其與SLE疾病活動的相關性；
　　2.了解SLE患者血清B細胞趨化因子(BLC)水平及其與SLE疾病活動的相關性；
　　3.了解SLE患者外周血B淋巴細胞脂筏及F-actin表達模式及其與SLE疾病活動的相關性。
　　方法:
　　1．采用ELISA方法檢測SLE患者外周血BLC的濃度；
　　2．采用流式細胞儀檢測SLE患者外周血B淋巴細胞亞型

2、及其脂筏的表達；
　　3．磁珠分選B淋巴細胞，采用流式細胞儀及共聚焦熒光顯微鏡檢測SLE患者外周血B細胞脂筏；同時，采用共聚焦熒光顯微鏡觀察F-actin的表達及分布；
　　4．外周血單個核細胞的分離和培養(yǎng)：分組（來氟米特組、空白對照組）干預培養(yǎng)活動期SLE患者外周血B淋巴細胞，流式細胞儀、共聚焦熒光顯微鏡檢測B細胞脂筏表達變化，共聚焦熒光顯微鏡觀察B細胞F-actin表達變化。
　　5．統(tǒng)計學方法：數(shù)據(jù)以`x±SD或

3、中位數(shù)（四分位數(shù)）表示；兩組間差異比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗或Wilcoxon檢驗分析，多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H檢驗或One-Way ANOVA分析；兩兩相關性采用Spearman法分析。
　　結果:
　　1．入選60例SLE患者，其中女性55例，男性5例，年齡14～61歲（32.06±11.38歲），活動期SLE患者44例，狼瘡腎炎(LN)33例。對照組為20例性別年齡相匹配

4、的健康志愿者。
　　2． SLE患者較健康對照者淋巴細胞中B細胞比例升高(22.76±14.70％VS11.43±3.61%， p=0.01)；CD5、CD95在兩組B淋巴細胞中表達無差異(CD526.45±15.80%VS30.22±11.80%, p=0.409;CD9528.03±9.71%VS25.65±7.44%, p=0.74)，但SLE患者CD38+B細胞比例明顯升高(72.89±13.75%VS50.94±7.45

5、%, p=0.001)；SLE患者IgD+CD27+B細胞比例明顯降低(10.96±8.25%VS16.58±7.45%, p=0.031)，其中狼瘡腎炎患者較無狼瘡腎炎SLE患者IgD+CD27+B細胞比例降低明顯(11.7±5.8%VS15.6±8.92%, p=0.032)；SLE患者CD38+B細胞比例與SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平、補體C3、C4水平無明顯相關性；SLE患者外周血CD27+IgD+B淋巴細胞比例與抗ds

6、-DNA抗體呈負相關(r=-0.484， p=0.049)，與SLEDAI、血清補體C3水平、補體C4水平無相關性。
　　3． SLE患者較健康對照者外周血血清BLC濃度明顯升高(183(104-432) VS103(62-166), p=0.008)；狼瘡腎炎患者較無狼瘡腎炎SLE患者血清BLC濃度明顯升高(261(131-606) VS136(102-260), p=0.041)，狼瘡腎炎患者較無狼瘡腎炎SLE患者外周血補體C

7、3水平明顯降低(553(420-715) VS723(575-860), p=0.042)。SLE患者血清BLC濃度與其血清補體C3水平呈負相關性(r=-0.32，p=0.027)，與SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平、補體C4水平、24小時尿蛋白定量無明顯相關性；初診SLE患者接受免疫抑制劑治療6個月后外周血BLC濃度、SLEDAI評分、抗ds-DNA抗體滴度均較治療前明顯降低(CXCL13215(107-589) VS154(10

8、0-302), p=0.041;SLEDAI14(10-18) VS2(1-2), p=0.001;抗ds-DNA抗體水平169(139-189) VS46(10-133), p=0.012)，補體C3、C4水平升高(C3421(259-533) VS733(648-899), p=0.001;C464(32-113) VS168(139-189), p=0.001)；
　　4． SLE患者外周血B淋巴細胞脂筏表達水平(54.05

9、±14.80%)較健康對照者(32.19±11.07%)明顯增高，活動期SLE患者B淋巴細胞脂筏表達水平(62.04±13.24%)較非活動期SLE患者(46.86±12.44%)明顯增高(F=20.126，p<0.001)；CD95+B細胞脂筏表達水平在SLE組、對照組間表達無差異(17.71±7.87%VS12.03±4.04%, p=0.056)，但SLE組CD38+B細胞脂筏表達水平(34.27±8.69%)較健康對照組(18.

10、82±9.40%)明顯升高(p=0.002)。并且，SLE患者外周血B細胞脂筏表達水平與其SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平呈明顯正相關(r1=0.568, p1<0.001;r2=0.394, p2=0.028)，與補體C3、C4無明顯相關性；SLE患者CD38+B細胞脂筏表達水平與其血清補體C3水平呈明顯負相關(r=-0.718, p=0.013)，與SLEDAI、抗ds-DNA抗體、補體C4無明顯相關性。
　　5．共聚焦熒

11、光顯微鏡觀察B淋巴細胞脂筏及F-actin的分布及表達時發(fā)現(xiàn)，在正常對照組中，脂筏主要均勻分布于B細胞膜中，散在出現(xiàn)小范圍聚集；F-actin主要分布于B細胞的外層。而在SLE組中，B淋巴細胞脂筏可出現(xiàn)表達和分布的異常，呈現(xiàn)細胞膜熒光染色厚度的增厚、聚集范圍擴大及熒光強度的增強；同時伴隨著F-actin染色熒光強度的降減；
　　6．體外干預培養(yǎng)試驗中，流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)來氟米特能降低CTB與B細胞脂筏結合水平(48.14±16.1

12、4%VS39.22±15.64%, p=0.037)；共聚焦熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)來氟米特能減少B細胞脂筏的聚集，改變F-actin的形態(tài)結構。
　　結論:
　　1． SLE患者，特別是狼瘡腎炎患者，血清中BLC濃度異常增高；血清BLC可能作為判斷SLE患者腎臟損害的一個有效分子標記物；
　　2． SLE患者外周血B淋巴細胞亞群表達模式存在異常，CD38+B細胞和IgD+CD27+B細胞亞群失調可能與SLE發(fā)病機制相關；<