白花蛇舌草可吸收成分測(cè)定及其對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的影響.pdf

1、目的：擬采用超高效液相色譜-光電二極管陣列(UPLC-PDA)法檢測(cè)白花蛇舌草化學(xué)成分的含量以及經(jīng)胃入血的可吸收成分，并探討血漿中可吸收成分對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的治療作用。
　　方法：①采用UPLC-PDA法測(cè)定白花蛇舌草中成分的含量。繪制各成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)精密度、回收率、樣本穩(wěn)定性和重現(xiàn)性進(jìn)行驗(yàn)證。②比較空白對(duì)照組血漿，阿魏酸、對(duì)香豆酸對(duì)照品與白花蛇舌草溶液灌胃SD大鼠血漿樣本的紫外光譜圖及色譜圖，測(cè)定該兩種成分是否被S

2、D大鼠吸收入血。③分別用低中高劑量阿魏酸干預(yù)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)模型大鼠，用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法(ELISA)測(cè)定血清中TNF-α和IL-1β的含量，篩選阿魏酸高中低三個(gè)劑量中最佳干預(yù)劑量。④以篩選出的阿魏酸劑量為干預(yù)措施，從CIA大鼠的一般情況、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足爪腫脹度、關(guān)節(jié)滑膜組織病理改變及關(guān)節(jié)X線攝片，以及血清IL-1β、TNF-α水平多個(gè)方面，進(jìn)一步探討阿魏酸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。
　　結(jié)果：⑴白花蛇舌草中阿魏酸、

3、對(duì)香豆酸成分色譜峰獲得分離，阿魏酸線性范圍0.005-0.08 mg/ml(R2=0.9994)，平均加樣回收率為100.40％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)為1.26％;對(duì)香豆酸線性范圍0.0028-0.045mg/ml(R2=0.9998)，平均加樣回收率為99.86％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)為2.41％。測(cè)得白花蛇舌草生藥中阿魏酸含量為233ng/mg，對(duì)香豆酸為529ng/mg；⑵在灌胃白花蛇舌草SD大鼠血漿中測(cè)得阿魏酸、對(duì)香豆酸兩種成份

4、；⑶低、中、高劑量的阿魏酸，均能不同程度地下調(diào)CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α水平，但以高劑量阿魏酸下調(diào)幅度最為明顯差異有顯著性。⑷以高劑量阿魏酸干預(yù)CIA大鼠。一般情況觀察:模型組大鼠精神委靡，飲食、活動(dòng)減少，后期可見毛發(fā)枯燥等癥狀;阿魏酸治療組，在治療2周后上述情況改善，正常組大鼠則未出現(xiàn)上述表現(xiàn)。體質(zhì)量增長(zhǎng)變化情況:模型組與治療組較正常組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢;治療3周后，治療組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)較模型組明顯(P＜0.05)。關(guān)節(jié)炎指數(shù)

5、評(píng)分:在實(shí)驗(yàn)的前4周，模型組、治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分逐漸增加，在第21天左右達(dá)到高峰;在第35天、42天時(shí)，治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯低于模型組(P＜0.01)。足爪腫脹度檢測(cè):模型組大鼠足爪厚度較正常組明顯增加(P＜0.01)，并逐漸上升;治療組大鼠足爪厚度，在治療3周后與模型組比較明顯減少(P＜0.01)。關(guān)節(jié)X線攝片觀察:免疫后14天左右，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)周圍組織腫脹，隨著病程延長(zhǎng)，足趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯骨侵蝕病灶、關(guān)節(jié)間隙狹窄及融合等

6、表現(xiàn)。治療4周后，治療組大鼠關(guān)節(jié)周圍組織腫脹程度減低，骨質(zhì)破壞程度減弱。HE染色病理學(xué)觀察:模型組滑膜組織可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、大量新生血管、滑膜增厚等病理特征;治療組新生血管及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，滑膜輕度增厚。血清IL-1β、TNF-α水平:在第28天、42天時(shí)，模型組、治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平較正常組明顯升高(P＜0.01)，但治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平明顯低于模型組(P＜0.01)。
　　結(jié)論：①采用