藍(lán)萼甲素對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：探討藍(lán)萼甲素（Glaucocalyxin A,GLA）對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制作用及其作用機(jī)制，為GLA的抗腫瘤作用及用于臨床提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：以不同濃度的GLA干預(yù)體外培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞,用MTT法觀察其對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期變化; Hoechst33258染色觀察給藥后A549細(xì)胞核形態(tài)的變化，透射電鏡（TEM）觀察A549細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變,掃描電鏡(SEM)

2、觀察A549細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)改變;western blot法檢測(cè)GLA對(duì)caspase-3、8和PARP蛋白表達(dá)的改變。RT-PCR方法檢測(cè)GLA對(duì)A549細(xì)胞內(nèi)caspase-3、8和PARP基因表達(dá)的影響。實(shí)時(shí)定量(Real time)PCR檢測(cè)A549細(xì)胞內(nèi)microRNA30a的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：GLA對(duì)體外培養(yǎng)A549細(xì)胞具有增殖抑制作用（P＜0.05，P＜0.01），并呈劑量和時(shí)間依賴(lài)趨勢(shì)；Hoechst33258染色

3、后，熒光顯微鏡下可見(jiàn)A549細(xì)胞胞核致密濃染;TEM觀察可見(jiàn)A549細(xì)胞核皺縮、染色質(zhì)邊集等細(xì)胞凋亡的特征性改變；SEM觀察可見(jiàn)A549細(xì)胞微絨毛減少，部分細(xì)胞膜表面出現(xiàn)一些大小不一的凹陷或孔洞。流式細(xì)胞儀PI單染結(jié)果顯示不同濃度GLA作用A549細(xì)胞48h后，S期細(xì)胞比例增加（P＜0.05）；AnnexinⅤ-FITC雙染結(jié)果顯示不同濃度GLA作用于A549細(xì)胞48h后,細(xì)胞凋亡率逐漸增加（P＜0.01），3-甲基腺嘌呤(3-MA)與

4、GLA聯(lián)合應(yīng)用可使細(xì)胞凋亡率增加（P＜0.05）；GLA干預(yù)A549細(xì)胞后Western blot檢測(cè)結(jié)果:caspase3、caspase8、PARP蛋白表達(dá)上調(diào)，且均呈劑量依賴(lài)趨勢(shì)；RT-PCR結(jié)果：caspase-3mRNA、caspase-8mRNA、PARPmRNA的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），Real time PCR結(jié)果表明，microRNA30a表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：藍(lán)萼甲素(GLA)對(duì)體外培養(yǎng)人肺癌