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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:觀察烏司他丁對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠T淋巴細(xì)胞凋亡的影響,證實(shí)烏司他丁的直接免疫調(diào)節(jié)效應(yīng);通過(guò)分析烏司他丁對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠脾淋巴細(xì)胞氧化應(yīng)激水平及線粒體凋亡信號(hào)通路等的影響,闡釋其改善T淋巴細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。
方法:清潔級(jí)Wistar大鼠36只,隨機(jī)分為(n=12):(1)假手術(shù)對(duì)照(Sham)組;(2)重癥急性胰腺炎(SAP)模型組;(3)烏司他丁治療組。采用膽胰管逆行注入5%牛磺膽酸鈉的方法制備大鼠SAP模型,烏司
2、他丁治療組在制作SAP模型后經(jīng)尾靜脈緩慢注射烏司他丁1萬(wàn)U/Kg體重。術(shù)后24小時(shí)首先采用直接免疫熒光法對(duì)CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,再應(yīng)用Annexin-Ⅴ/PI雙染法標(biāo)記凋亡細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組大鼠CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例及各亞群凋亡細(xì)胞比例;以2,7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針檢測(cè)各組大鼠淋巴細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,羥胺法檢測(cè)血清超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥酸法檢測(cè)血清丙二醛含量;以羅丹明
3、123為探針,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組大鼠淋巴細(xì)胞線粒體膜電位,采用酯化鈣黃綠素和氯化鈷共孵育的方法檢測(cè)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放水平。
結(jié)果:1、與假手術(shù)對(duì)照組相比,SAP模型組CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值均顯著下降(P<0.01),同時(shí)CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群凋亡細(xì)胞比例均顯著升高(P<0.01),尤以CD4+T淋巴細(xì)胞為著,烏司他丁治療組CD4+T淋巴細(xì)胞的凋亡比例顯著降低(P<0.01),C
4、D4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值則顯著回升(P<0.01);2、SAP模型組淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS熒光強(qiáng)度及血清MDA含量顯著高于假手術(shù)對(duì)照組(P<0.01),血清SOD活力則顯著低于假手術(shù)對(duì)照組(P<0.01),烏司他丁治療組淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平和血清MDA含量顯著下降(P<0.01),血清SOD活力則顯著回升(P<0.01);3、SAP模型組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔異常開放的淋巴細(xì)胞比例較假手術(shù)對(duì)照組顯著升高(P<0.01
5、),線粒體膜電位降低的淋巴細(xì)胞比例增多(P<0.01),烏司他丁治療組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的異常開放和線粒體膜電位下降的淋巴細(xì)胞比例顯著下降(P<0.01)。
結(jié)論:1、烏司他丁通過(guò)減少SAP大鼠CD4+T淋巴細(xì)胞的異常凋亡,改善機(jī)體免疫抑制狀態(tài),起到直接的免疫增強(qiáng)效應(yīng);2、烏司他丁可顯著降低SAP大鼠脾淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平,提高血清SOD活力及降低血清MDA含量,從而通過(guò)有效提高機(jī)體對(duì)氧自由基的清除能力,降低淋巴細(xì)胞凋亡程度,
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