人臍血單核細胞不同移植時間對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的神經保護作用研究.pdf

1、研究背景：
　　新生兒缺氧缺血性腦病(Hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE)是指發(fā)生在新生兒圍生期因缺氧或缺血引起的腦組織的病變，是導致新生兒急性死亡和后期嚴重神經系統(tǒng)后遺癥的常見病因之一，包括視聽障礙、精神發(fā)育異常、腦性癱瘓、癲癇等永久性神經系統(tǒng)傷殘，嚴重影響了患兒的整體的生命質量。孕婦妊娠中晚期強烈的子宮收縮、胎盤早剝及生產時缺氧等都可以導致胎兒在宮內或生產時發(fā)生窒息。急性胎兒窒息可以發(fā)生在胎

2、兒產前宮內窒息、產時缺氧窒息以及產后呼吸抑制窒息的任一時期，從而導致HIE的發(fā)生。在足月新生兒中，缺氧缺血性腦病的發(fā)生率為0.1％-0.3%，在早產兒中其發(fā)生率則更高。HIE可導致患兒在出生時或生后不久直接死亡，幸存者仍可遺留永久性神經系統(tǒng)傷殘，嚴重影響了患兒的整體生命質量，對患兒個人、家庭乃至整個社會都造成了沉重的負擔，嚴重影響到我國全體人民的身心健康及國民經濟的發(fā)展。
　　迄今為止，針對 HIE的治療主要包括急性期的支持治療、

3、營養(yǎng)腦細胞治療及后天的康復訓練等，但這些治療并不能促進神經細胞的再生，不能阻止神經系統(tǒng)后遺癥的發(fā)生。因此，盡管近幾十年來圍生醫(yī)學及康復醫(yī)學得到了快速發(fā)展，人們在圍生期就重視避免HIE的發(fā)生，但因HIE導致的新生兒死亡率及腦癱發(fā)生率任然無明顯變化。近年來，間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）移植治療的發(fā)現為HIE治療帶來了曙光。也為HIE的治療提供了一個新的平臺。
　　MSCs源于中胚層的間充質，其

4、形態(tài)與成纖維細胞相似，廣泛存在于骨髓、臍血、脂肪等全身多種組織中。MSCs是不僅能夠具有自我更新的潛能，且能多向分成為各種組織細胞，在特定條件下能夠分化成為全身多種不同的組織細胞。MSCs的廣泛分化潛能及低免疫原性成為近年來醫(yī)學及生物學領域的研究熱點，為新生兒缺氧缺血性腦病、腦卒中、脊髓損傷、腦癱及神經元細胞變性等疾病的治療提供了曙光。人臍血單核細胞（Human Cord Blood Mononuclear Cells，HCMNCs）中

5、含有豐富的間充質干細胞及造血干細胞等原始祖細胞。人臍帶血單核細胞具有很多優(yōu)點，其易于采集，可在患兒分娩后立即獲得；對患兒無創(chuàng)傷，不受倫理限制。因此，HCMNCs成為近來研究的熱點。
　　近年來，盡管干細胞移植治療 HIE的研究很多，但具體移植時間的及途徑的選擇任有爭論，尤其在移植時間的選擇方面，國內外研究尚未統(tǒng)一。本次實驗研究的目的：通過鼻腔內移植HCMNCs治療HIBD大鼠，探討不同移植時間對HIBD后大鼠遠期神經行為功能的影響

6、及腦組織損傷恢復的影響。
　　為此，特開展以下研究：
　　目的：探討人臍血單核細胞(HCMNCs)不同移植時間對新生缺氧缺血性腦損傷(HIBD)大鼠遠期神經行為學及與腦組織損傷修復影響。
　　方法：新生7 d齡SD大鼠100只，隨機分為5組，HIBD動物模型建立方法采用Rice-Vannucci等研究，在缺氧缺血腦損傷后24h，HIBD+24 h移植組大鼠鼻腔內滴入0.5×106 UC-MSCs(在50ul的0.9%N

7、aCl中)；HIBD+24 hNaCl組鼻腔內滴入等量的生理鹽水（NaCl）；缺氧缺血腦損傷后72 h，HIBD+72 h移植組大鼠鼻腔內滴入0.5×106 UC-MSCs(在50ul的0.9%NaCl中)；HIBD+72 hNaCl組鼻腔內滴入等量的生理鹽水（NaCl）；應用早期神經反射及水迷宮實驗來評價大鼠神經行為學功能；頭顱MRI、腦組織形態(tài)學評分及突觸超微結構來評估大鼠損傷腦組織的恢復。
　　結果：兩組HIBD+NaCl對

8、照組各項檢測結果相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；HIBD+24h移植組及HIBD+72h移植組與其對應的HIBD+NaCl組相比，生后第14d的早期反射中，懸崖調轉[（16.93±6.67）s比（23.51±6.88）s、（12.56±5.25）s比（22.25±5.59）s]及陰性趨地性反射時間[（19.16±5.53）s比（24.84±5.45）s、（14.76±5.86）s比（23.55±5.61）s]均明顯縮短(P<0.

9、05)；Morris水迷宮實驗中，逃避潛伏期縮短[（26.34±5.89）s比（32.82±8.73）s、（21.32±8.22）s比（34.86±7.67） s]，游泳距離縮短[（12.73±3.15）cm比（15.41±2.72）cm、（10.76±3.02）cm比（14.93±3.63）cm]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；頭顱MRI檢查示腦損傷容量縮小[（32.22±8.10）%比（39.49±11.88）%、（26.02±

10、6.28）%比（38.68±10.01）%]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；大鼠腦組織形態(tài)學評分減小[（1.89±1.04）比（1.61±0.92）、（2.61±1.62）比（2.74±1.42）]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；透射電鏡觀察突觸間隙減小[（21.40±2.05）nm比（22.68±2.24）nm、（20.14±1.52） nm比（22.65±2.23） nm]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HIBD+72h