不同環(huán)境因素對寡鏈與變鏈雙菌種生物膜形成的影響.pdf

1、目的:
　　本課題的研究目的是觀察不同環(huán)境條件對寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌雙菌種生物膜形成的影響，并與血鏈球菌與變異鏈球菌的雙菌株生物膜形成進行比較，從而探討寡發(fā)酵鏈球菌在變異鏈球菌生物膜形成中的作用，進一步評估寡發(fā)酵鏈球菌作為一種口腔有益細菌在維持口腔微生態(tài)環(huán)境中的意義。
　　方法:
　　1唾液采集
　　取三名健康成年人無刺激性靜止唾液，離心(10000×g，20 min)后取上清液，4℃儲存?zhèn)溆?。待使用前?.

2、22μm孔徑的無菌一次性濾過膜濾過滅菌。
　　2建立唾液包被模型
　?、僭?6孔板每孔中加入滅菌過的唾液，于37℃環(huán)境下靜置30分鐘，建立唾液包被的聚丙乙烯表面模型;②在無菌玻璃管中加入滅菌過的唾液，于37℃環(huán)境下靜置30分鐘，建立唾液包被的光滑玻璃表面模型。、
　　3單、雙菌株生物模型的建立
　　單菌株模型:寡發(fā)酵鏈球菌、血鏈球菌、變異鏈球菌
　　雙菌株模型:寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌共同培養(yǎng)，血鏈球菌與變

3、異鏈球菌共同培養(yǎng)
　　4不同環(huán)境下觀察單/雙菌株生物模型中細菌的相互作用
　　①運用平板計數(shù)法測定不同環(huán)境下單/雙菌株唾液包被的玻璃生物模型中細菌的粘附狀況。
　　②運用番紅精染色法測定不同環(huán)境下單/雙菌株唾液包被的聚丙乙烯生物模型中細菌的粘附狀況。
　　5激光共聚焦顯微鏡觀察不同蔗糖濃度下單/雙菌株生物模型中生物膜的厚度
　　結(jié)果:
　　1氧環(huán)境對雙菌株生物模型中細菌相互作用的影響
　　①菌落

4、計數(shù)法測定氧環(huán)境對雙菌株模型中細菌相互作用的影響
　　兩種氧環(huán)境下，單菌株模型中變異鏈球菌菌落數(shù)最多，血鏈球菌次之，但二者無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌菌落數(shù)最少。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌和變異鏈球菌、血鏈球菌與變異鏈球菌共培養(yǎng)后，三者菌落數(shù)均減少。厭氧環(huán)境三種細菌菌落數(shù)均小于有氧環(huán)境，雙菌株模型中三種細菌菌落數(shù)降低的幅度亦小于有氧環(huán)境。
　?、诜t精染色法測定氧環(huán)境對雙菌株模型中細菌相互作用的影響
　　兩種氧環(huán)境下，單菌株模型

5、變異鏈球菌粘附量最高，血鏈球菌次之，二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌最弱。雙菌株模型寡發(fā)酵鏈球菌和變異鏈球菌、血鏈球菌和變異鏈球菌共培養(yǎng)后粘附量均低于三者單獨培養(yǎng)。厭氧環(huán)境三種細菌粘附力均弱于有氧環(huán)境，雙菌株模型中細菌的粘附量降低幅度亦低于有氧環(huán)境。
　　2蔗糖環(huán)境對雙菌株生物模型中細菌相互作用的影響
　?、倬溆嫈?shù)法測定蔗糖環(huán)境對雙菌株模型中細菌相互作用的影響
　　無蔗糖環(huán)境下，單菌株血鏈球菌細菌菌落數(shù)最多，寡發(fā)鏈

6、球菌次之，但二者無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌菌落數(shù)最少。1％蔗糖和5％蔗糖下，單菌株寡發(fā)酵鏈球菌細菌菌落數(shù)最多，血鏈球菌次之。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈球菌和變異鏈球菌共培養(yǎng)后，三者菌落數(shù)均減少。
　?、诜t精染色法測定蔗糖環(huán)境對雙菌株模型中細菌相互作用的影響
　　無蔗糖環(huán)境下，單菌株變異鏈球菌粘附量最高，血鏈球菌次之，但二者無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌粘附量最低。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈球菌和變異鏈球菌共

7、培養(yǎng)后粘附量均降低。1％蔗糖環(huán)境和5％蔗糖環(huán)境單、雙菌株粘附同無糖環(huán)境。但寡發(fā)酵鏈球菌和變異鏈球菌的粘附量1％蔗糖＞無蔗糖＞5％蔗糖，雙菌株培養(yǎng)后粘附量降低情況1％蔗糖＞無蔗糖＞5％蔗糖;血鏈球菌粘附量無蔗糖＞1％糖＞5％蔗糖，雙菌株培養(yǎng)后粘附降低情況無蔗糖＞1％糖＞5％蔗糖。
　　3環(huán)境pH對雙菌株生物模型中細菌相互作用的影響
　?、倬溆嫈?shù)法測定環(huán)境pH對雙菌株模型中細菌相互作用的影響
　　pH5.5環(huán)境下，單菌株

8、變異鏈球菌菌落數(shù)最多，血鏈球菌次之，二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌菌落數(shù)最少。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈球菌與變異鏈球菌共培養(yǎng)后，三者菌落數(shù)均降低，但與單菌株比較無統(tǒng)計學(xué)差異。pH6.0環(huán)境下，單菌株變異鏈球菌菌落數(shù)最多，血鏈球菌次之，二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌菌落數(shù)最少。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈球菌與變異鏈球菌共培養(yǎng)后，三者菌落數(shù)亦降低。pH6.5、pH7.0、pH7.5、pH8.0單雙菌株細菌菌落形

9、成情況與pH6.0近似。但單菌株細菌菌落形成情況pH7.0＞pH6.5＞pH6.0和pH7.5（二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異），雙菌株細菌菌落數(shù)降低情況pH7.0＞pH6.5＞pH6.0和pH7.5（二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異）。
　　②番紅精染色法測定環(huán)境pH對雙菌株模型中細菌相互作用的影響
　　pH5.5環(huán)境下，單菌株變異鏈球菌粘附量最多，血鏈球菌次之，二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌粘附量最少。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈

10、球菌與變異鏈球菌共培養(yǎng)后，三者粘附量均降低，但與單菌株比較無統(tǒng)計學(xué)差異。pH6.0環(huán)境下，單菌株變異鏈球菌粘附量最多，血鏈球菌次之，二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異，寡發(fā)酵鏈球菌粘附量最少。雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈球菌與變異鏈球菌共培養(yǎng)后，三者粘附量亦降低。pH6.5、pH7.0、pH7.5、pH8.0單雙菌株細菌粘附情況與pH6.0近似。但單菌株細菌粘附量pH7.0＞pH6.5＞pH6.0和pH7.5（二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異），雙菌株細

11、菌粘附量降低情況pH7.0＞pH6.5＞pH6.0和pH7.5（二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異）。
　　4激光共聚焦顯微鏡觀察不同蔗糖濃度下單/雙菌株生物模型中生物膜的厚度
　　1％蔗糖條件下變異鏈球菌生物膜最厚，血鏈球菌次之，寡發(fā)酵鏈球菌最薄，無蔗糖條件下血鏈球菌生物膜最厚，變異鏈球菌次之，寡發(fā)酵鏈球菌最薄。兩種糖條件下，雙菌株寡發(fā)酵鏈球菌與變異鏈球菌、血鏈球菌與變異鏈球菌厚度與單菌株比均降低。
　　結(jié)論:
　　1環(huán)境氧

12、條件影響寡發(fā)酵鏈球菌和變異鏈球菌的相互作用
　　兩種氧條件寡發(fā)酵鏈球菌均能夠?qū)ψ儺愭溓蚓恼掣疆a(chǎn)生抑制作用，且有氧條件下的抑制能力強于厭氧條件。無論哪種氧條件，寡發(fā)酵鏈球菌對變異鏈球菌粘附的抑制能力均強于血鏈球菌。
　　2蔗糖條件影響寡發(fā)酵鏈球菌和變異鏈球菌的相互作用
　　三種蔗糖條件下，寡發(fā)酵鏈球菌和血鏈球菌對變鏈的粘附均具有抑制作用，寡發(fā)酵鏈球菌在1％蔗糖條件下對變異鏈球菌的粘附抑制能力最強，無糖條件次之，5％蔗糖

13、條件抑制能力最弱。而血鏈在無糖條件下對變鏈粘附的抑制能力最強，1％蔗糖次之，5％蔗糖條件抑制能力最弱。
　　3環(huán)境pH影響寡發(fā)酵鏈球菌和變異鏈球菌的相互作用
　　pH7.0條件下，寡發(fā)酵鏈球菌和血鏈球菌對變異鏈球菌粘附的抑制能力最強，pH6.5條件次之，pH6.0和pH7.5條件下寡發(fā)酵鏈球菌和血鏈球菌對變異鏈球菌粘附的抑制能力最弱，且pH6.0和pH7.5條件下寡發(fā)酵鏈球菌和血鏈球菌對變鏈粘附的抑制能力相比較，二者之間沒有