利用大腸桿菌和煙草表達的重組全人源藥用抗EGFR單鏈抗體的抗腫瘤分析.pdf

1、表皮生長因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）是腫瘤治療中一個很重要的靶分子，針對EGFR靶點的抗體藥物的研究具有廣闊的前景。scFv是一種小分子抗體片段，其免疫原性較小，已逐漸成為抗體靶向治療的重要研究方向。目前，雖然動物細胞表達抗體時，抗體活性高，但生產成本高。原核生物反應器可以有效的解決生產成本高的缺陷，但是其仍存在不足之處，它不能對翻譯后的蛋白進行修飾，因而只適合表達 Fv，scF

2、v、Fab等抗體。植物生物反應器可以解決以上兩者的缺陷，被認為是一種生產成本低、蛋白活性高的生物反應器。如已經(jīng)有多種Fab、scFv等都已在植物中成功地表達。抗體經(jīng)歷了鼠源抗體，人源化抗體和全人源抗體三個階段，全人源scFv能很大程度的消減HAMA反應。乳腺癌是常見的惡性腫瘤?？笶GFR單克隆抗體具有抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖的作用。
　　本試驗采用生物信息方法對HLL和LLH基因序列進行構建，并預測這兩種蛋白的性質。構建了pE

3、T-28a-c(+)-HLL、pET-28a-c(+)-LLH表達載體；利用E.coli生產HLL-pET和LLH-pET蛋白，并分析其抗腫瘤活性。構建了pBI121-HLL-YC表達載體；利用煙草生產HLL-YC蛋白，并對其進行了Western Blotting檢測。為了提高目的蛋白在煙草中的表達量和生物活性，構建了HLL-YCPH-YC和LLH-YCPH-YC基因序列。研究結果如下：
　　1.HLL、LLH的生化指標都與可溶性

4、scFv相符，但只有HLL與可溶性scFv有相似的空間結構。
　　2.構建了pET-28a-c(+)-HLL、pET-28a-c(+)-LLH表達載體，表達了HLL-pET和LLH-pET蛋白。HLL-pET對MCF-7有顯著的增殖抑制作用，具有生物活性。LLH-pET對MCF-7無顯著的增殖抑制作用，不具有生物活性。
　　3.構建了pBI121-HLL-YC表達載體，表達了HLL-YC蛋白。
　　4.構建了HLL-Y