Notch信號介導全反式維甲酸抑制大鼠后肢芽基質細胞軟骨發(fā)育形成的作用.pdf

1、目的：
　　研究全反式維甲酸（ATRA）對大鼠后肢芽基質細胞（rEHBMCs）的軟骨發(fā)育的抑制作用，并探討其相關的分子機制。
　　方法：
　　體內試驗：HE染色檢測ATRA對胎鼠后肢軟骨發(fā)育的作用，免疫組化檢測ATRA對胎鼠后肢軟骨細胞增殖與分化的作用，免疫熒光檢測ATRA對胎鼠后肢軟骨Notch1的作用。體外實驗：CCK8和阿利新藍染色檢測ATRA對rEHBMCs的細胞增殖和聚集的作用，RT-PCR和Western-

2、blot檢測ATRA對軟骨特異性分子SOX9和COL2A1，以及Notch1、Hes-1基因表達的影響。
　　結果：
　　體內試驗：我們HE染色顯示：ATRA抑制大鼠后肢軟骨的增殖與分化，ATRA組中軟骨生長板增殖區(qū)與肥大區(qū)明顯縮短。免疫組化檢測提示，ATRA組中軟骨生長板增殖明顯減弱，SOX9表達減少。免疫熒光結果提示，ATRA組中軟骨生長板Notch1表達明顯增強。體外實驗： CCK8實驗表明ATRA對rEHBMCs的增

3、殖具有劑量依賴性的抑制作用。阿利新藍染色表明，ATRA10-6mmol/L和ATRA10-5mmol/L顯著減少軟骨細胞的數(shù)量和面積（與對照組相比較，P<0.01）。我們的RT-PCR結果顯示，ATRA劑量依賴性地下調SOX9和COL2A1（與對照組相比，P<0.05或0.01）的mRNA轉錄水平。同樣的，ATRA也呈劑量依賴性地下調SOX9和COL2A1的蛋白表達水平（與對照組相比，P<0.05或0.01）。此外，ATRA顯著升高No

4、tch1、Hes-1（與對照組相比，P<0.01）的mRNA轉錄水平和蛋白水平,且具有劑量依賴性。為了進一步研究ATRA抑制rEHBMCs軟骨發(fā)育的分子機制，我們使用了Notch信號阻斷劑-DAPT，結果顯示，相比于ATRA單獨誘導rEHBMCs，DAPT能拮抗ATRA,顯著增加SOX9和COL2A1表達（P<0.05），同時，微團培養(yǎng)結果也提示相比于ATRA單獨誘導rEHBMCs，DAPT能拮抗ATRA,顯著增加軟骨結節(jié)。