白蘭組培芽的誘導(dǎo)和繼代機(jī)理與技術(shù)研究.pdf

1、白蘭（Michelia alba DC.）是我國南方廣為種植常綠喬木，在亞熱帶地區(qū)種子稀少，有性繁殖率低。本研究擬通過對(duì)其芽的誘導(dǎo)和繼代機(jī)理與技術(shù)研究，通過截頂處理，用高效液相色譜法測定白蘭自然腋芽和組培芽體內(nèi)源激素調(diào)控下的芽增殖和生長的變化規(guī)律，以適應(yīng)未來規(guī)?；缒旧a(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)需求，為白蘭組織培養(yǎng)體系的建立及其他樹木的芽高效誘導(dǎo)和增殖提供參考和理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴白蘭自然芽內(nèi)源激素的測定，截去頂芽42 d后，

2、植株上的腋芽萌發(fā)長至3 cm，內(nèi)源ZT和IAA含量分別從164.78μg·gFW-1和8.76μg·gFW-1升高到175.43μg·gFW-1和13.43μg·gFW-1，內(nèi)源ZT與IAA比值從18.81減少到13.06。⑵組織培養(yǎng)外植體的消毒，用0.1％的升汞溶液消毒為4 min時(shí)，成活率最高可達(dá)到48.89%。⑶愈傷組織誘導(dǎo)，外植體選擇植株頂芽部分或嫩莖段，配方為MS+NAA0.5 mg·L-1+IBA1.5mg·L-1+6-BA

3、1.5mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1誘導(dǎo)率高達(dá)86.67%。⑷愈傷組織增殖培養(yǎng)，經(jīng)篩選蔗糖濃度在30 g·L-1時(shí)效果最好。配方選用MS+NAA0.5 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1+KT1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1可獲得最高增殖率10.18%。愈傷組織增殖培養(yǎng)35 d后重量達(dá)到3.70 g，增量為3.35 g，且質(zhì)量在0-21 d內(nèi)變化明顯，同時(shí)ZT、GA3、IAA

4、呈上升趨勢，培養(yǎng)21 d后，增殖速率減緩。⑸芽誘導(dǎo)最佳配方選擇MS+NAA0.5 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1誘導(dǎo)率最好為72.22%。用高效液相色譜法分析芽誘導(dǎo)中外源激素對(duì)內(nèi)源激素的作用，固定6-BA濃度為0.5 mg·L-1改變NAA濃度，發(fā)現(xiàn)外源NAA的添加對(duì)內(nèi)源ZT和IAA都有促進(jìn)作用。NAA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)內(nèi)源ZT含量在28 d時(shí)達(dá)到峰值175.91μg·gF

5、W-1，此時(shí)芽誘導(dǎo)率為70.37%。當(dāng)NAA濃度為1.0 mg·L-1時(shí)，IAA增量最高為2.90μg·gFW-1。固定NAA濃度為0.5 mg·L-1改變6-BA濃度，當(dāng)6-BA濃度為2 mg·L-1時(shí)，內(nèi)源ZT含量在28d時(shí)可達(dá)到最高為178.36μg·gFW-1，增量為13.51μg·gFW-1，此時(shí)芽誘導(dǎo)率為59.26%。但6-BA對(duì)IAA促進(jìn)作用不強(qiáng)。⑹芽增殖培養(yǎng)選用配方B5+NAA0.05 mg·L-1+TDZ0.05 mg

6、·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1可獲最大增殖倍數(shù)2.78。影響芽增殖倍數(shù)各因素的主次關(guān)系為TDZ>NAA>培養(yǎng)基。增殖培養(yǎng)21 d時(shí)，內(nèi)源激素ZT含量達(dá)到峰值180.96μg·gFW-1，內(nèi)源IAA含量培養(yǎng)35 d后為11.76μg·gFW-1，表現(xiàn)平穩(wěn)，二者比例從14.83升高到15.18。增殖過程中，新生芽體從7 d以后開始發(fā)生，21 d后迅速生長，到35 d時(shí)可達(dá)到1.0 cm。相比與同等大小的白蘭自然腋芽，增殖

7、芽內(nèi)源ZT含量較自然芽高6.16μg·gFW-1，IAA含量高1.17μg·gFW-1，ZT與IAA比值低了1.1，且此時(shí)組培芽長勢較弱，說明剛增殖出的小芽生長力不如自然芽，需進(jìn)一步培養(yǎng)調(diào)整內(nèi)源激素含量和比值，使芽體壯大。⑺壯苗培養(yǎng)選用配方MS+6-BA0.01 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1可獲最佳效果且苗高可達(dá)到3 cm左右。壯苗培養(yǎng)35 d后內(nèi)源ZT含量達(dá)到180.22μg·gF

8、W-1，增量為1.68μg·gFW-1，內(nèi)源IAA含量達(dá)到14.40μg·gFW-1，增量為2.68μg·gFW-1。而二者比值從15.18降低到12.52。相比同等大小的自然腋芽，組培苗內(nèi)源ZT含量高4.79μg·gFW-1，內(nèi)源IAA含量高0.97μg·gFW-1，而ZT與IAA比值較自然腋芽低0.53。此時(shí)組培苗生長趨勢更好，生長速度也更快，表現(xiàn)了壯苗培養(yǎng)的意義。⑻將組培芽和自然芽生長過程分為1 cm、2 cm、3 cm，比較兩者

9、生長時(shí)間和內(nèi)源激素。從誘導(dǎo)出芽體到長度為3 cm，組培芽需要49 d，自然芽需要42 d，但從1 cm生長到3 cm，組培芽比自然芽時(shí)間少7 d，所以芽體大量繁殖時(shí)，更能體現(xiàn)組培優(yōu)勢。從1 cm到3 cm，組培芽和自然芽的內(nèi)源ZT與IAA含量都呈升高趨勢。3cm的組培芽和自然芽內(nèi)源ZT含量分別為179.69μg·gFW-1和175.43μg·gFW-1，自然芽增量更大為3.05μg·gFW-1，內(nèi)源IAA含量分別為11.76μg·gFW