彌散性低劑量532nm激光眼損傷的研究.pdf

1、目的:
　　建立有效、可控、簡便、重復(fù)性好的彌散性低劑量532nm激光眼損傷動物模型。觀察致傷生物效應(yīng),得出量效關(guān)系,并探討可能的分子機(jī)制。
　　方法:
　　采用相應(yīng)激光器和自制裝置造模,將實驗動物按時間點分為照射后即刻、1d、3d、5d、7d和14d組。用直接眼底鏡、彩色眼底照相、FFA觀察受照后實驗動物的眼底改變,行視網(wǎng)膜電流圖檢查,HE染色、超微電鏡觀察組織學(xué)變化,TUNEL染色觀察細(xì)胞凋亡,免疫組化、常規(guī)RT-

2、PCR和實時定量RT-PCR觀察神經(jīng)營養(yǎng)因子受體的變化。
　　結(jié)果:
　　1、建立了無肉眼可見的損傷的、彌散性532nm激光照射的動物模型。此模型中眼底照相及眼底血管熒光造影均未見異常。
　　2、視網(wǎng)膜電流圖5項檢查顯示,隨照射時間的增加,暗適應(yīng)視桿細(xì)胞反應(yīng)b波振幅明顯降低,與正常對照組有統(tǒng)計學(xué)意義上的差異(P<0.05);暗適應(yīng)眼的最大混合反應(yīng)a、b波潛伏期延長,振幅降低(P<0.05);振蕩電位無明顯變化(P>0.

3、05);明適應(yīng)視錐細(xì)胞反應(yīng)a、b波振幅明顯降低(P<0.05)。
　　3、HE染色顯示,正常對照組的各時點之間ONL厚度的差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),除受照后即刻以外,其余各時點ONL厚度與正常對照組相比較,差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4、電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察顯示,隨著照射時間的延長,外節(jié)盤膜結(jié)構(gòu)紊亂,出現(xiàn)分解、碎裂及空泡變,內(nèi)節(jié)線粒體腫脹呈球形變。外核層細(xì)胞核排列紊亂,核膜皺縮,核染色質(zhì)固縮凝集、溶解、空泡

4、變,出現(xiàn)凋亡小體。
　　5、TUNEL染色顯示,陽性的細(xì)胞幾乎都位于外核層。于激光照射第1d外核層開始出現(xiàn),第3d、5d、7d、14d陽性細(xì)胞數(shù)量接近,但由于外核層持續(xù)變薄,凋亡指數(shù)呈上升趨勢,與正常對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義上的差異(P<0.05),各組間比較亦有差異(P<0.05)。
　　6、神經(jīng)營養(yǎng)因子受體TrkA、TrkB、TrkC和P75NTR的免疫組化顯示,在正常大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)核層,光感受器和

5、色素上皮層均有基礎(chǔ)量表達(dá),傷后不同時間點TrkA和TrkB在視網(wǎng)膜各層的表達(dá)無明顯差異;而TrkC和P75NTR在各層視網(wǎng)膜組織中表達(dá)量明顯增加,而在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞內(nèi)節(jié)和視網(wǎng)膜色素上皮層的表達(dá)增加尤為明顯。受照后3d,5d表達(dá)量持續(xù)增高,各時間點P75NTR在視網(wǎng)膜內(nèi)節(jié)的表達(dá)與外節(jié)之間有明顯的分界線,在受照后14d組,這種分界尤為明顯。
　　7、常規(guī)RT-PCR和實時定量RT-PCR均顯示:視網(wǎng)膜P75NTR表達(dá)

6、明顯增加,在激光損傷后24小時開始表達(dá),3天表達(dá)明顯升高,并隨著照射時間的延長,在7天、14天有更高的表達(dá);TrkA、TrkB在視網(wǎng)膜中的表達(dá)在各時間點無明顯差異;而可以與NT-3、NT-4/5結(jié)合的TrkC的表達(dá)量隨照射時間延長持續(xù)升高。
　　結(jié)論:
　　1、本研究建立了有效的、可控制的、簡便易行、重復(fù)性好的低劑量激光重復(fù)輻照致眼損傷的動物模型。
　　2、在低功率和低能量密度的彌散性532nm激光作用下,以每日照射2

7、次,每次連續(xù)照射1小時的頻率,連續(xù)照射2周,并未對大鼠的視網(wǎng)膜造成肉眼可見的損傷。
　　3、造模組視網(wǎng)膜電生理活動減弱,且減弱程度與照射時間的延長密切相關(guān)。提示在低劑量激光重復(fù)照射致眼損傷的臨床診斷及對預(yù)后的評估中,眼電生理檢查應(yīng)被列為重要的一項輔助檢查。受照7d至14d為激光眩目眼損傷致傷效應(yīng)的平臺期。
　　4、隨著照射時間的延長,視網(wǎng)膜感光細(xì)胞層變薄進(jìn)行性加重,而非壞死性的細(xì)胞凋亡是這種視網(wǎng)膜激光損傷模型感光細(xì)胞減少的主