2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:制備新生鼠腸道損傷修復模型,給予PTEN抑制劑—phen干預腸道損傷修復過程。通過腸道組織病理切片,按照Nadler評分標準[1]評估腸道病理損傷情況,觀察腸道損傷修復過程中不同時間點腸道組織病理改變。通過Real time PCR、Western blot技術,觀察損傷修復過程中Lgr5、β-catenin和PTEN mRNA及蛋白的表達及隨時間變化情況。初步探索PTEN抑制劑phen在新生鼠腸道損傷修復中的作用。
  第

2、一部分 PTEN抑制劑作用于新生鼠腸道損傷修復模型的組織學變化研究
  方法:利用缺氧和冷刺激復制新生大鼠腸道損傷修復模型。1日齡新生鼠(清潔級,SD大鼠)隨機分為正常對照組(N)、實驗對照組(C)及干預組(E)。均由母鼠喂養(yǎng)。正常對照組不給予任何刺激與干預。實驗對照組和干預組,每天早8點和晚8點同時給予缺氧(含6%O2的N2,30min)及冷刺激(4℃冰箱,20分鐘)各1次,連續(xù)3天。每天第1次缺氧冷刺激后,干預組另給予phen

3、1.6μmol/kg/d(生理鹽水溶解,濃度為0.08μmol/ml)腹腔注射,而實驗對照組則給予相同容量生理鹽水腹腔注射。制模過程中觀察新生鼠對刺激的反應、進食情況及活動狀況,觀察新生鼠有無腹脹、腹瀉及胃潴留,并于實驗前和實驗后第4天(完成制模后24h)測量體重,比較各組新生鼠體重變化情況。分別于實驗最后一次缺氧和冷刺激后24h(1d)、48h(2d)、72h(3d)和120h(5d)脫臼處死新生大鼠5只,標記為N1、N2、N3、N5

4、;C1、C2、C3、C5和E1、E2、E3、E5(各組5只,共60只)。取新生鼠回盲部腸道組織做病理切片,用Nadler評分標準[1]評估腸道損傷與修復情況。
  結果:
  1.制模過程中,實驗對照組和干預組新生鼠相繼出現不同程度的進食減少、活動下降,并伴有不同程度的腹瀉、腹脹。
  2.實驗前,正常對照組、實驗對照組和干預組新生鼠平均體重分別為7.36±0.10g、7.59±0.19g和7.60±0.11g,三組新

5、生鼠平均體重差異不具有統(tǒng)計學意義,P=0.407;實驗后,正常對照組、實驗對照組和干預組的平均體重分別為11.17±0.15、10.38±0.31和10.75±0.14g,實驗對照組體重明顯低于正常對照組,P=0.032,差異具有有統(tǒng)計學意義。干預組平均體重雖低于正常對照組但高于實驗對照組,組間差異不具有統(tǒng)計學意義,PEvsN=0.054、PEvsC=0.295。
  3.標本取材中發(fā)現,實驗對照組和干預組新生鼠腹腔有不同程度的渾

6、濁,甚至血性滲液,腸管色澤異常,呈節(jié)段性水腫充血、斑片狀出血或彈性消失,解剖時偶可見到腹腔內有糞便。
  4.HE染色正常對照組的回盲部絨毛結構完整,排列規(guī)則;腺體排列規(guī)則、組織結構清楚;固有層血管無擴張,無明顯充血及炎性細胞浸潤。干預組和實驗對照組中可見不同程度的粘膜及粘膜下層充血水腫;固有層炎癥細胞浸潤;粘膜不同程度的點狀、片狀壞死脫落;病理評分介于1-3級之間。干預組、實驗對照組病理損傷程度明顯重于正常對照組,三樣本比較的秩

7、和檢驗差異具有統(tǒng)計學意義,P=0.000,干預組較實驗對照組平均病理損傷程度較輕,但無統(tǒng)計學差異,p=0.468。
  結論:
  1.6%O2缺氧30min及4℃冷刺激20min制備的新生鼠腸道損傷修復模型,外觀表現、體重變化及腸道組織病理改變明顯,且模型存活時間較長,更有利于組織病理的實驗研究。
  2.模型中病理損傷最重出現于實驗后第2、3天,第5天腸道病理損傷程度較第2、3天減輕,反映腸道損傷后自我修復過程。<

8、br>  3.PTEN抑制劑干預新生鼠腸道損傷修復過程,可改善其外觀表現,體重較病變組增加,病理損傷程度減輕,但不具統(tǒng)計學意義,P=0.468。
  第二部分 PTEN抑制劑影響腸道損傷修復過程中Lgr5、β-catenin和PTEN基因表達的實驗研究
  方法:同第一部分實驗方法,復制新生鼠腸道損傷修復模型同時給予PTEN抑制劑—phen干預,分為正常對照組(N)、實驗對照組(C)和干預組(E)。分別于最后一次缺氧冷刺激后

9、的24h(1d)、48h(2d)和72h(3d)取回盲部腸道標本(標記為N1、N2、N3; C1、C2、C3; E1、E2、E3,每組5只,共45只)。通過Real-time PCR和Western Blot分子生物學技術,測定腸道組織勻漿中Lgr5、β-catenin和PTEN基因的mRNA及蛋白的表達水平,初步探索PTEN抑制劑在腸道損傷修復過程中的影響作用。
  結果:
  1.Lgr5 mRNA及蛋白表達水平:C組與

10、E組制模后均較N組升高,且E組更高于C組。Lgr5 mRNA表達升高,C1組vs N1組,P=0.031;E1組vs C1組,P=0.032; E2組vsC2組,P=0.005,差異有統(tǒng)計學意義;C2組vs N2組,P=0.264; C3組vs N3組,P=0.146,E3組vs C3組,P=0.081,不具統(tǒng)計學差異。Lgr5蛋白表達升高,C1組vs N1組,P=0.045; E1組vs C1組,P=0.036;差異有統(tǒng)計學意義。C2

11、組vs N2組,P=0.062; C3組vs N3組,P=0.059; E2組vs C2組,P=0.093;E3組vs C3組,P=0.177,不具統(tǒng)計學差異。
  2.β-catenin mRNA及蛋白表達水平:C組與E組制模后均較N組升高,且E組更高于C組。β-catenin mRNA表達升高,C1組vs N1組,P=0.039;E1組vs C1組,P=0.008; E2組vsC2組,P=0.010,差異有統(tǒng)計學意義;C2組v

12、s N2組,P=0.060; C3組vs N3組,P=0.200,E3組vs C3組,P=0.077,不具統(tǒng)計學差異。p-β-catenin蛋白表達升高,C1組vs N1組,P=0.013; C2組vs N2組,P=0.007; E1組vs C1組,P=0.043;差異有統(tǒng)計學意義;C3組vs N3組,P=0.052; E2組vs C2組,P=0.109;E3組vs C3組,P=0.094,不具統(tǒng)計學差異。
  3.PTENmRN

13、A及蛋白表達水平:C組與E組制模后均較N組下降,且E組更低于C組。PTENmRNA表達下降,C1組vs N1組,P=0.038;E1組vs C1組,P=0.003; E2組vsC2組,P=0.030; E3組vs C3組,P=0.030,差異有統(tǒng)計學意義;C2組vs N2組,P=0.134; C3組vs N3組,P=0.679,不具統(tǒng)計學差異。PTEN蛋白表達下降,C1組vs N1組,P=0.037; E2組vs C2組,P=0.008

14、; E3組vsC3組,P=0.048,差異有統(tǒng)計學意義;C2組vs N2組,P=0.123; C3組vs N3組,P=0.522,E1組vs C1組,P=0.093;不具統(tǒng)計學差異。
  4.Lgr5與β-catenin mRNA表達水平呈正相關,相關系數r=0.885,P=0.000;Lgr5與PTEN mRNA的表達水平呈負相關,相關系數r=-0.877,P=0.000。Western blot Lgr5、p-β-cateni

15、n、PTEN蛋白的表達水平趨勢和Real time PCR Lgr5、β-catenin、PTEN mRNA的表達水平和相一致,Lgr5和p-β-catenin蛋白的表達水平呈正相關,相關系數r=0.789,P=0.000; Lgr5和PTEN蛋白平均水平呈負相關,相關系數r=-0.823,P=0.000。
  5.PTEN蛋白的表達C3組高于C1組,P=0.022,其余Lgr5、β-catenin和PTENmRNA及蛋白表達水平

16、在各自組內、不同時間點的變化比較均無顯著性差異。
  結論:
  1.腸道損傷修復期,Lgr5和β-catenin轉錄與蛋白表達水平升高,與修復期腸道干細胞分化、增殖增加有關。PTEN表達增加可能為機體的負反饋調節(jié)機制所致。
  2.PTEN抑制劑通過下調PTENmRNA和蛋白表達水平,從而上調Lgr5和β-catenin mRNA和蛋白表達水平,以促進腸道損傷后腸干細胞的分化與增殖,加速腸粘膜損傷后修復。
  

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