過(guò)敏性哮喘的皮下特異性免疫治療：CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞和Th1-Th2細(xì)胞的變化及速發(fā)不良反應(yīng)分析.pdf

1、本文對(duì)過(guò)敏性哮喘的皮下特異性免疫治療:CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞的變化及速發(fā)不良反應(yīng)進(jìn)行了分析。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞在屋塵螨皮下特異性免疫治療中的變化。
　　目的：觀察CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞（nTreg）與IFN-γ+CD4+T細(xì)胞/IL-4+CD4+T細(xì)胞（Th1/Th2細(xì)胞）以及細(xì)胞因子I

2、L-5、IL-10、IL-17、IFN-γ和TNF-α在皮下屋塵螨特異性免疫治療（HDM-SCIT）中的變化，探討SCIT可能的作用機(jī)制。
　　方法：選取2011年12月至2013年12月在廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科接受HDM-SCIT的27例支氣管哮喘（或伴變應(yīng)性鼻炎）患者作為SIT組，其中男16例，女11例，平均年齡為（25.7±11.8）歲；接受藥物治療的21例未控制哮喘（或伴變應(yīng)性鼻炎）患者作為未控制組，其中男13

3、例，女8例，平均年齡為（32.2±13.2）歲；接受藥物治療的22例控制哮喘（或伴變應(yīng)性鼻炎）患者作為控制組，其中男13例，女9例，平均年齡為（28.0±9.5）歲；再選取20例健康人作為健康對(duì)照組，男女各10例，平均年齡為（26.3±4.0）歲。對(duì)受試者進(jìn)行過(guò)敏原皮試（SPT）、肺通氣功能檢查、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（BPT）、外周嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)以及抽取外周靜脈血測(cè)定屋塵螨特異性IgE（sIgE）、粉塵螨sIgE和總IgE（TIg

4、E），采取靜脈血外周單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）做HDM提取液（25μg/ml）刺激培養(yǎng),培養(yǎng)72小時(shí)之后利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞以及CD4+IFN-γ+T/CD4+IL-4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，并且提取培養(yǎng)上清液以測(cè)定IL-5、IL-10、IL-17、IFN-γ以及TNF-α濃度；同時(shí)對(duì)每一位病例組（未控制組和控制組）患者發(fā)放哮喘生命質(zhì)量問(wèn)卷（AQLQs）以評(píng)估病例組患者的生命質(zhì)量水平。
　　

5、結(jié)果：⑴未控制組及控制組患者FEV1占預(yù)計(jì)值百分比（FEV1％預(yù)計(jì)值）顯著低于健康對(duì)照組水平（p均<0.01），而SIT組FEV1%預(yù)計(jì)值與健康對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；SIT組、未控制組以及控制組存在氣道反應(yīng)性增高，但是SIT的氣道反應(yīng)性級(jí)別明顯低于未控制組及控制組（p<0.001）。⑵PBMC中nTreg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比（nTreg%CD4+T細(xì)胞）在SIT組及健康對(duì)照組的水平較高，在未控制組及控制組中較低，

6、但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.219）；經(jīng)HDM提取液刺激后的nTreg%CD4+T細(xì)胞，在SIT組中最高，其次為健康對(duì)照組，最低為未控制組，但四組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.392）；與未刺激時(shí)的基礎(chǔ)值比較,經(jīng) HDM提取液刺激后的nTreg%CD4+T細(xì)胞在 SIT組(p<0.001)、未控制組(p=0.007)、控制組(p=0.007)和健康對(duì)照組(p=0.014)均顯著上升；而增幅在各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.655）。⑶未

7、刺激和經(jīng)HDM提取液刺激后的Th1細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比（Th1%CD4+T細(xì)胞）在SIT組、未控制組、控制組以及健康對(duì)照組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且四組經(jīng)HDM提取液刺激后的Th1%CD4+T細(xì)胞與未刺激時(shí)的基礎(chǔ)值比較，差異也均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑷SIT組以及未控制組患者的Th2細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比（Th2%CD4+T細(xì)胞）的基礎(chǔ)值顯著高于健康對(duì)照組（p=0.011，p=0.028），其余組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)HDM提取液刺激后

8、，則僅表現(xiàn)為未控制組高于健康對(duì)照組（p=0.03）。四組經(jīng)HDM提取液刺激后的Th2%CD4+T細(xì)胞與基礎(chǔ)值比較，只有SIT組的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.008）。⑸基礎(chǔ)值比較，健康對(duì)照組 Th1/Th2比例高于 SIT組（p=0.004）、未控制組（p=0.044）和控制組（p=0.029）；而經(jīng)HDM提取液刺激后四組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四組經(jīng)HDM提取液刺激后的Th1/Th2比例與基礎(chǔ)值比較，SIT組以及控制組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p

9、=0.03，p=0.045）,其余兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑹未刺激時(shí)，細(xì)胞因子水平表現(xiàn)為未控制組的IL-5以及IL-10水平顯著高于SIT組（p=0.032，P=0.044）、控制組（p=0.01，p=0.003）和健康對(duì)照組（p=0.024，p=0.037）；而經(jīng)HDM提取液刺激后，表現(xiàn)為IL-5、IL-10、IL-17和TNF-α在健康對(duì)照組顯著低于SIT組、未控制組和控制組（p均<0.05）。未刺激時(shí)IL-17水平、IFN-γ和TN

10、F-α水平以及經(jīng)HDM提取液刺激后的IFN-γ水平在四組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。未刺激與經(jīng)HDM提取液刺激后的組內(nèi)比較表現(xiàn)為，SIT組IL-5、IL-10、IL-17、IFN-γ以及TNF-α5種細(xì)胞因子均顯著上升（p均<0.01）；健康對(duì)照組則除了IFN-γ和TNF-α上升有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（p均<0.01）,其余三種細(xì)胞因子無(wú)明顯改變；未控制組的IL-5、IL-10以及IL-17有顯著上升（p均<0.01），IFN-γ和TNF-α無(wú)顯著

11、改變；控制組除了IFN-γ無(wú)顯著改變外，其余4種細(xì)胞因子均顯著上升（p均<0.01）。⑺在SIT組中，支氣管激發(fā)試驗(yàn)陽(yáng)性的患者的IL-17（經(jīng)HDM提取液刺激后）水平顯著高于支氣管激發(fā)試驗(yàn)為陰性的患者(p=0.035)；經(jīng)HDM提取液刺激后的IL-5水平與EOS絕對(duì)值（r=0.559，p=0.03）、TIgE呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.685，p=0.005）；未刺激和經(jīng)HDM提取液刺激后的nTreg%CD4+T細(xì)胞均與經(jīng)HDM提取液刺激后的

12、Th1%CD4+T細(xì)胞呈正相關(guān)關(guān)系；（r=0.597，p=0.013；r=0.485，p=0.048）。⑻在病例組中（包括未控制組和控制組），F(xiàn)EV1%預(yù)計(jì)值與經(jīng)HDM提取液刺激后 IFN-γ的水平（r=0.483，p=0.019），IL-10經(jīng) HDM提取液刺激后上升的幅度（r=0.378，p=0.047）以及Th1/Th2比例經(jīng)HDM提取液刺激后上升的幅度（r=0.523， p=0.013）呈正相關(guān)關(guān)系；而哮喘生命質(zhì)量評(píng)分則與nTr

13、eg%CD4+T細(xì)胞經(jīng)HDM提取液刺激后上升的幅度呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.539，p=0.007）。
　　結(jié)論：①HDM-SCIT可改善HDM過(guò)敏性哮喘患者的FEV1%預(yù)計(jì)值，且可顯著降低患者的氣道反應(yīng)性。②哮喘患者存在Th1/Th2比例下降。③HDM-SCIT可能通過(guò)降低Th2細(xì)胞水平，提高Th1/Th2比例，以發(fā)揮其臨床效應(yīng)。測(cè)定外周血中Th1/Th2比例及其對(duì)過(guò)敏原的反應(yīng)能力可能預(yù)測(cè)HDM-SCIT的療效。④受過(guò)敏原刺激時(shí)，哮

14、喘患者表現(xiàn)為IL-5、IL-10和IL-17大幅度增高，而健康對(duì)照主要表現(xiàn)為IFN-γ以及TNF-α水平上升。⑤接受HDM-SCIT滿1年可使nTreg水平接近健康對(duì)照組，隨著治療的持續(xù)， nTreg可能有上升趨勢(shì)，但需進(jìn)一步觀察。
　　第二部分：皮下注射標(biāo)準(zhǔn)化屋塵螨變應(yīng)原疫苗治療支氣管哮喘和（或）變應(yīng)性鼻炎的速發(fā)不良反應(yīng)。
　　目的：分析應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化屋塵螨變應(yīng)原對(duì)變應(yīng)性哮喘和（或）變應(yīng)性鼻炎進(jìn)行皮下特異性免疫治療的速發(fā)不良反

15、應(yīng)。
　　方法：回顧性記錄廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科2004年11月至2012年5月對(duì)屋塵螨過(guò)敏的哮喘和（或）變應(yīng)性鼻炎患者接受SCIT過(guò)程中出現(xiàn)的速發(fā)不良反應(yīng)，并分析速發(fā)不良反應(yīng)與注射劑量、患者年齡、性別、患病種類(lèi)和變態(tài)反應(yīng)程度的關(guān)系。
　　結(jié)果：⑴研究共納入462例患者，其中452例（97.8%）出現(xiàn)速發(fā)局部不良反應(yīng)，153例（33.1%）出現(xiàn)速發(fā)全身不良反應(yīng)；所有患者共接受15645針次皮下注射，其中8523針

16、次（54.5%）出現(xiàn)速發(fā)局部不良反應(yīng)，397針次（2.5%）出現(xiàn)速發(fā)全身不良反應(yīng)。⑵速發(fā)局部不良反應(yīng)發(fā)生率隨劑量增加而增高，而速發(fā)全身不良反應(yīng)主要分布在劑量快速上升階段（2000～80000 SQU）。⑶單純哮喘及哮喘合并變應(yīng)性鼻炎的速發(fā)不良反應(yīng)（局部和全身）的發(fā)生率高于單純變應(yīng)性鼻炎（p<0.01）。⑷兒童速發(fā)局部不良反應(yīng)發(fā)生率高于成人（p<0.001），但速發(fā)全身不良反應(yīng)的發(fā)生率在兒童及成人患者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。⑸

17、兒童患者中，男性速發(fā)不良反應(yīng)發(fā)生率（局部和全身）高于女性（p<0.01）；而在成人患者中，女性速發(fā)不良反應(yīng)發(fā)生率（局部和全身）高于男性（p<0.01）。⑻速發(fā)不良反應(yīng)（局部和全身）的發(fā)生率隨著屋塵螨 sIgE級(jí)別的增高而升高（p<0.001）；在皮下注射過(guò)程中，出現(xiàn)速發(fā)全身不良反應(yīng)者治療前TIgE水平高于未發(fā)生速發(fā)全身不良反應(yīng)者治療前TIgE水平（p=0.048）。
　　結(jié)論：對(duì)屋塵螨過(guò)敏的哮喘和（或）變應(yīng)性鼻炎患者進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化屋塵

18、螨變應(yīng)原的SCIT時(shí)，速發(fā)局部不良反應(yīng)常見(jiàn)，而速發(fā)全身不良反應(yīng)少見(jiàn)；哮喘和鼻炎合并哮喘、少年男性、成年女性及屋塵螨sIgE和TIgE水平較高時(shí)，速發(fā)不良反應(yīng)的發(fā)生率增高，且隨注射變應(yīng)原劑量遞增而存在增高趨勢(shì)，劑量快速上升階段應(yīng)警惕嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生。①SCIT對(duì)屋塵螨過(guò)敏的哮喘和（或）鼻炎患者有效且安全，但在劑量快速上升階段需要警惕嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生。②哮喘患者存在Th1/Th2比例下降。③HDM-SCIT可能通過(guò)降低Th2細(xì)胞水平，提