糖腎方對糖悄病腎病大鼠腎病NOX4及足細(xì)胞nephrin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本文以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，采用鏈脲佐菌素(Streptozocin，STZ)誘發(fā)DN(Diabetic Nephropathy)大鼠模型，以氯沙坦鉀(LosartanPotassium)為對照藥物，觀察糖腎方對早期糖尿病腎病大鼠一般狀態(tài)、腎臟組織nox4、nephrin蛋白及基因表達(dá)、足細(xì)胞形態(tài)的影響，探討糖腎方對早期糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　方法:雄性SD(Sprague Dawley)大鼠60只

2、，體重200±20g，隨機(jī)分成正常對照組(NS)，模型對照組(DN)，氯沙坦鉀治療組(ARB)、糖腎方組(ZY)和糖腎方加氯沙坦鉀組(ZX)。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg構(gòu)建大鼠糖尿病腎病模型。成模后中藥組每只大鼠以相當(dāng)于生藥28g/kg/d液體量灌胃，氯沙坦鉀組每只灌胃20mg/kg/d，中西組兩種藥物等劑量灌胃，正常對照組及模型組每日給予等量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥8周，每日灌胃一次，于4

3、、6、8周末測定血糖及24h尿蛋白定量，第8周末測定各組血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)等生化指標(biāo)，同時(shí)第8周末腎組織取材后通過PAS染色觀察腎臟病理改變;電鏡觀察腎臟組織超微結(jié)構(gòu)的改變;免疫組化檢測腎組織NOX4、nephrin蛋白的表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量(real time quantitative polymerase chain reation, Real-Time PCR)測定大鼠腎組織

4、NOX4、nephrin基因的mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.與正常組比較，模型組、中藥組、氯沙坦鉀組和中西組大鼠8周后體重顯著下降(P＜0.05)，中藥組、氯沙坦鉀組、中西組大鼠體重較模型組大鼠體重少量增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);模型組、中藥組、氯沙坦鉀組、中西組大鼠第8周末比正常組大鼠腎臟肥大指數(shù)（腎重/體重）明顯增加(P＜0.05)，與模型組相比，中藥組、氯沙坦鉀組、中西組大鼠的腎臟肥大指數(shù)均明顯下降

5、（P＜0.05）。
　　2.模型組、氯沙坦鉀組、中藥組、中西組大鼠24h尿蛋白定量隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長呈明顯增加趨勢。第4周末與正常組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量均上升明顯，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上4組之間無明顯差異(P＞0.05);第8周末，模型組大鼠24h尿蛋白與中藥組、氯沙坦鉀組、中西組比較顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中藥組、氯沙坦鉀組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);中西組較中藥組和氯沙坦鉀組大鼠24h尿蛋白定量

6、有所減輕，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.第8周末時(shí)，與模型組相比，中藥組、氯沙坦鉀組和中西組大鼠Scr、BUN水平明顯下降(P＜0.05);中藥組、氯沙坦鉀組、中西組之間Scr、BUN水平無顯著差異(P＞0.05)。
　　4.光鏡觀察:正常組大鼠腎臟腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見腎小球肥大，腎小球毛細(xì)血管基底膜、系膜基質(zhì)和系膜細(xì)胞無明顯改變。模型組對照組可見彌漫性系膜增生，腎小球明顯增大，系膜區(qū)變寬，系膜基質(zhì)增多等典型糖尿

7、病腎病病理改變。與模型組相比，中藥組、氯沙坦鉀組、中西組第8周末時(shí)大鼠病理改變有不同程度的減輕，腎小球肥大減輕，系膜基質(zhì)少量減少。
　　5.電鏡觀察:正常組腎小球基底膜均勻無增厚，足突分布均勻。模型對照組系膜基質(zhì)擴(kuò)大，系膜細(xì)胞增多，腎小球基底膜較正常組顯著增厚，足突增寬、廣泛融合。中藥組、氯沙坦鉀組、中西組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚減輕，系膜基質(zhì)減少，足突局部融合。
　　6.免疫組化結(jié)果顯示中藥組、氯沙坦鉀組、中西組NOX

8、4在腎臟表達(dá)低于模型組(P＜0.05)，其中中西組NOX較模型組下降最為明顯;中藥組和氯沙坦鉀組之間無顯著性差異(P＞0.05)。中藥組、氯沙坦鉀組、中西組治療糖尿病腎病模型大鼠后腎臟組織nephrin蛋白表達(dá)的下降水平較模型組明顯減輕(P＜0.05)，中藥組、氯沙坦鉀組、中西組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　7.實(shí)時(shí)熒光定量PCR示8周末模型組大鼠腎組織NOX4 mRNA的表達(dá)顯著高于中藥組和氯沙坦鉀組（P＜0.01）;

9、模型組大鼠腎組織nephrin mRNA基因的表達(dá)顯著低于正常組(P＜0.01)，中藥組、氯沙坦鉀組nephrin mRNA基因水平的下降較模型組明顯減輕(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)通過制作糖尿病腎病模型，以正常組、模型組為對照，應(yīng)用糖腎方對糖尿病腎病大鼠進(jìn)行干預(yù)，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出以下結(jié)論:
　　1.成功建立糖尿病腎病大鼠模型。
　　2.糖腎方能夠改善DN大鼠一般狀態(tài)，對DN大鼠腎臟具有一定的

10、保護(hù)作用，能夠減少24h尿蛋白排泄，調(diào)節(jié)脂類代謝，降低大鼠血清BUN、Scr水平，延緩DN進(jìn)展。
　　3.糖腎方能抑制DN大鼠腎臟組織NOX4的表達(dá)，減少NOX4 mRNA的表達(dá)，從而發(fā)揮治療作用，可能為本方防治糖尿病腎病的作用機(jī)制之一。
　　4.糖腎方能夠調(diào)控DN大鼠腎臟組織nephrin蛋白的表達(dá)，減少nephrin的損傷，增加nephrin mRNA的表達(dá)水平，減少減少足細(xì)胞的損傷，保護(hù)腎小球?yàn)V過膜，可能時(shí)期防治DN的