兒童阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征的發(fā)病機(jī)制和藥物作用機(jī)制的探討.pdf

1、目的:
　　1.了解白三烯（LTs）在阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）患兒扁桃體/腺樣體增生肥大發(fā)病中的作用。
　　2.了解1＜OAHI≤5的睡眠呼吸障礙（SDB）兒童體內(nèi)的炎癥水平，期望為我國兒童OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)再次修訂時(shí)是否將1＜OAHI≤5的SDB兒童定義為輕度OSAHS提供參考依據(jù)。
　　3.探討白三烯調(diào)節(jié)劑（LTM）和鼻內(nèi)用糖皮質(zhì)激素（ICS）有效縮小OSAHS患兒扁桃體/腺樣體增生肥大從而緩解

2、臨床癥狀的機(jī)制。
　　4.了解ICS是否有效抑制OSAHS患兒體內(nèi)的LTs合成，期望為兒童OSAHS治療藥物和聯(lián)合治療方案的選擇提供參考依據(jù)。
　　方法:
　　在體研究：
　　1.比較OSAHS患兒（包括OAHI＞5組和1＜OAHI≤5組）和RI患兒體內(nèi)LTs水平:收集“扁桃體/腺樣體切除術(shù)（AT）”切除的O爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)扁桃體/腺樣體組織中的CysLTs水平。
　　2.了解ICS

3、對(duì)OSAHS（OAHI＞5）患兒體內(nèi)LTs代謝的影響:收集OSAHS-ICS組和OSAHS-對(duì)照組患兒手術(shù)的扁桃體/腺樣體組織，利用熒光定量PCR法檢測(cè)扁桃體/腺樣體組織中的LTC4S mRNA表達(dá)水平，利用ELISA法檢測(cè)扁桃體/腺樣體組織中的CysLTs水平。
　　體外研究：
　　1.ICS對(duì)扁桃體細(xì)胞增殖的影響:將OSAHS（OAHI＞1）患兒手術(shù)切除的扁桃體組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，加入不同濃度的布地奈德（BUD），37℃5

4、％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)后利用內(nèi)鹽（MTS）法檢測(cè)細(xì)胞總體增殖情況。
　　2.ICS對(duì)LTC4S mRNA表達(dá)及CysLTs分泌水平的影響:將OSAHS（OAHI＞1）患兒手術(shù)切除的扁桃體組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，加入不同濃度的BUD，37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)后利用MTS法檢測(cè)細(xì)胞總體增殖情況。將細(xì)胞增殖抑制率為25%，35%，50%相應(yīng)的BUD濃度分別定義為低、中、高劑量BUD。在扁桃體細(xì)胞中分別加入低、中、高劑量BUD混合

5、培養(yǎng)48小時(shí)，離心，利用熒光定量PCR法檢測(cè)重懸物中LTC4S mRNA的表達(dá)水平，利用ELISA法檢測(cè)上清液中CysLTs分泌水平。
　　3.LTM對(duì)扁桃體細(xì)胞增殖的影響:將 OSAHS（OAHI＞1）患兒手術(shù)切除的扁桃體組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，加入不同濃度的孟魯斯特（MON），37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)后利用MTS法檢測(cè)細(xì)胞總體增殖情況。
　　結(jié)果:
　　1.本研究共收集33例扁桃體/腺樣體標(biāo)本，其中RI組7例，

6、OSAHS（1＜OAHI≤5）組9例[OAHI均值為3.19次/h（1.40～5.00次/h）]，OSAHS（OAHI＞5）組10例[OAHI均值為11.73次/h（5.40～23.77次/h）]，OSAHS-ICS（OAHI＞5）組7例[OAHI均值為14.27次/h（5.60～32.06次/h）]。
　　2．OSAHS（OAHI＞5）組患兒扁桃體/腺樣體組織中的LTC4S mRNA表達(dá)水平明顯高于 RI組（Z=-2.150，P

7、=0.032），OSAHS（OAHI＞5）組與OSAHS（1＜OAHI≤5）組患兒扁桃體/腺樣體組織中的LTC4S mRNA表達(dá)水平無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（Z=-1.103，P=0.270）。OSAHS（1＜OAHI≤5）組患兒扁桃體/腺樣體組織中的LTC4S mRNA表達(dá)水平明顯高于RI組（Z=-1.960，P=0.050）。
　　3. OSAHS（OAHI＞5）組、OSAHS（1＜OAHI≤5）組和RI組的CysLTs水平分別為

8、：6808.59±4297.12pg/ml，2389.96±1341.04pg/ml和1313.54±610.54pg/ml。OSAHS（OAHI＞5）組患兒扁桃體/腺樣體組織中的CysLTs水平明顯高于RI組（t=-3.328，P=0.005）和OSAHS（1＜OAHI≤5）組（t=2.951，P=0.009）。OSAHS（1＜OAHI≤5）組與RI組患兒扁桃體/腺樣體組織中的CysLTs水平雖然未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（t=-1.960，

9、P=0.070），但 OSAHS（1＜OAHI≤5）組有升高的趨勢(shì)。
　　4. OSAHS-ICS組患兒扁桃體/腺樣體組織中的LTC4S mRNA表達(dá)水平明顯低于 OSAHS-對(duì)照組（Z=-3.027，P=0.002）。OSAHS-ICS組和OSAHS-對(duì)照組CysLTs水平分別為5184.45±2901.39 pg/ml和6808.59±4297.12pg/ml，兩組間比較雖未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（t=0.867，P=0.400），

10、但OSAHS-ICS組有下降趨勢(shì)。
　　5. ICS對(duì)扁桃體細(xì)胞增殖的影響：共收集13例OSAHS（OAHI＞1）患兒手術(shù)切除的扁桃體組織，結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比， BUD（10-4M）組、BUD(5×10-5M)組、BUD(5×10-6M)組、BUD(5×10-7M)組和BUD(5×10-8M)組吸光度值均明顯下降，即扁桃體細(xì)胞增殖能力明顯抑制（t分別為4.858，4.281，3.131，3.077，3.213；P分別為0.0

11、00，0.000，0.005，0.005，0.004）。吸光度值與BUD濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.319，P=0.009），即扁桃體細(xì)胞增殖能力隨BUD濃度增加而下降。
　　6. ICS對(duì)LTC4S mRNA表達(dá)和CysLTs分泌水平的影響：共收集13例OSAHS（OAHI＞1）患兒手術(shù)切除的扁桃體組織，結(jié)果顯示細(xì)胞生長抑制率為25%、35%和50%的BUD濃度分別為5×10-13M、5×10-10M和5×10-5M，即低劑量、中劑

12、量和高劑量BUD的濃度分別為5×10-13M、5×10-10M和5×10-5M。高劑量BUD組LTC4S mRNA表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組（Z=-3.257，P=0.001）。中劑量BUD組和低劑量 BUD組與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（Z分別為-0.795和-0.898，P分別為0.427和0.369）。空白對(duì)照組、低劑量BUD組、中劑量BUD組和高劑量BUD組的CysLTs分泌水平分別為：53.75±18.07pg/ml，41

13、.03±12.58pg/ml，49.93±16.67pg/ml和58.47±19.25pg/ml，各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（F=2.504，P=0.070）。
　　7. LTM對(duì)扁桃體細(xì)胞增殖的影響：共收集7例OSAHS（OAHI＞1）患兒手術(shù)切除的扁桃體組織，結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比，MON（10-4M）組吸光度值明顯下降，即扁桃體細(xì)胞增殖能力明顯抑制（t=6.888，P=0.000）。MON(10-5M)組、MON(10-

14、6M)組、MON(10-7M)組和MON(10-8M)組扁桃體細(xì)胞增殖能力與空白對(duì)照組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（t分別為-0.495，-0.774，-0.082，0.082；P分別為0.629，0.454，0.936，0.936）。
　　結(jié)論:
　　1.符合我國診斷標(biāo)準(zhǔn)的OSAHS（OAHI＞5）患兒扁桃體/腺樣體組織的LTC4S mRNA表達(dá)和CysLTs分泌水平明顯升高，提示白三烯參與了OSAHS患兒扁桃體/腺樣體增生肥

15、大的過程。
　　2．符合AASM兒童OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)但未達(dá)我國兒童診斷標(biāo)準(zhǔn)的1＜OAHI≤5的SDB兒童，扁桃體/腺樣體組織LTC4S mRNA表達(dá)水平明顯增高，CysLTs分泌水平呈增高的趨勢(shì)，表現(xiàn)出與OAHI＞5的OSAHS患兒相似的炎癥反應(yīng)。本結(jié)果為我國兒童OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)再次修訂時(shí)是否將1＜OAHI≤5的SDB兒童定義為輕度OSAHS提供參考，期望使更多的SDB兒童得到更早期診斷和治療。
　　3．LTM和ICS均