核孔蛋白和蛋白乙?；滦椭兴幹委煇盒匝翰〉姆肿影悬c.pdf

1、第一部分 魚藤素對Burkitt淋巴瘤細胞周期及細胞周期蛋白的調(diào)節(jié)作用 目的：研究魚藤素對人類Burkitt淋巴瘤Raji和Daudi細胞系體外抗腫瘤作用，對比研究其對正常人外周血單個核細胞的細胞毒性，探討其抗癌作用的分子機理。 方法：采用MTT法檢測細胞增殖活性，Hoechst33258染色和Annexin-V/PI雙標(biāo)法檢測細胞凋亡，流式細胞儀檢測細胞周期分布，Westernblot檢測魚藤素對Daudi細胞

2、CyclinD1及pRb蛋白表達的影響。 結(jié)果：(1)魚藤素對Raji和Daudi細胞具有明顯的增殖抑制作用，而對正常人外周血單個核細胞細胞增殖抑制作用不明顯。(2)魚藤素可以誘導(dǎo)Raji和Daudi細胞凋亡，Hoechst33258染色可見Raji細胞產(chǎn)生典型凋亡細胞特征。AnnexinV-PI雙標(biāo)法顯示魚藤素以劑量依賴式誘導(dǎo)Daudi細胞早期凋亡。(3)魚藤素作用Daudi細胞周期發(fā)生變化，0、10、20和40nmol/L魚

3、藤素作用Daudi細胞24h，使細胞周期聚積于G1/G0期，G1/G0期比例從37.34％逐漸增加至56.56％，呈劑量依賴式逐漸增加；相反S期呈劑量依賴式逐漸降低，其比例從37.72％逐漸降低至21.36％。而對G2/M期細胞作用不明顯。魚藤素作用Raji細胞周期發(fā)生變化，主要使細胞周期聚積于G2/M期，0、10、20和40nmol/L魚藤素作用Raji細胞24h，G2/M期細胞比例從13.04％增加至54.7％。(4)魚藤素對正常人

4、外周血單個核細胞無明顯抑制增殖作用。(5)魚藤素以劑量依賴式使CyclinD1及pRb蛋白表達降低。 結(jié)論：魚藤素能夠抑制Raji和Daudi細胞增殖，并誘導(dǎo)細胞凋亡，使Daudi細胞阻滯于G1/G0期而使Raji細胞阻滯于G2/M期，魚藤素對正常人外周血單個核細胞無明顯細胞毒作用，而選擇性作用于腫瘤細胞。其對抗腫瘤機制可能通過下調(diào)CyclinD1和pRb蛋白表達有關(guān)。 第二部分 魚藤素對U937細胞周期及核孔蛋

5、白Nup98和Nup88調(diào)控作用 目的：研究魚藤素對人類單個核白血病細胞株U937細胞系體外抗腫瘤作用，研究其引起細胞周期與核孔蛋白Nup98和Nup88的改變，探討其抗癌作用的分子機理。 方法：采用MTT法檢測細胞增殖活性，流式細胞儀檢測細胞周期分布，激光共聚焦顯微鏡檢測Nup98和Nup88蛋白表達變化，免疫電鏡和流式細胞儀觀測魚藤素對Nup98和Nup88的調(diào)控，Westernblot檢測魚藤素對U937細胞Nup

6、98和Nup88蛋白表達的影響。 結(jié)果：(1)魚藤素對U937細胞具有明顯的增殖抑制作用，其抑制作用呈時間與劑量依賴式。(2)魚藤素可以誘導(dǎo)U937細胞凋亡，Hoechst33258染色可見典型凋亡細胞特征。(3)魚藤素作用U937后細胞周期發(fā)生變化，0、5、10、20、40nmol/L魚藤素處理U937細胞24h，主要使細胞阻滯于S期和G2/M期，而G1/G0期細胞呈濃度依賴式降低。G1/G0期細胞比例依次為73.01％，71

7、.15％，68.42％，52.45％，43.99％和22.82％，S期細胞比例依次為17.18％，16.3％，18.09％，27.56％，31.21％和46.85％，G2/M期細胞比例依次為9.75％，12.31％，13.09％，18.99％，24.83％和27.79％。(4)魚藤素可以調(diào)節(jié)U937細胞Nup98和Nup88的表達，低濃度(nmol水平)即可使Nup98表達下調(diào)，而使Nup88表達上調(diào)，這為魚藤素抗腫瘤機理的研究提供了重

8、要的理論依據(jù)。 結(jié)論：魚藤素能夠抑制U937細胞增殖，使細胞阻滯于S期和G2/M期，而G1/G0期細胞呈濃度依賴式降低，并誘導(dǎo)細胞凋亡。其抗腫瘤機制可能通過參與調(diào)控U937細胞Nup98和Nup88的表達，使Nup98表達下調(diào)，而使Nup88表達上調(diào)有關(guān)。 第三部分 姜黃素作為新型的組蛋白去乙酰化酶抑制調(diào)控B細胞系淋巴瘤的增殖作用 目的：了解姜黃素對B細胞系淋巴瘤細胞系Raji細胞組蛋白去乙?；?HDA

9、C1，HDAC3，HDAC8)和乙?；慕M蛋白H4(Ac-HistoneH4)的影響，探討其對抑制淋巴瘤細胞增殖的分子機制。 方法：采用四唑鹽(MTT)比色檢測檢測Raji細胞增殖，免疫印跡(Westernblot)檢測Raji細胞HDAC1，HDAC3，HDAC8和Ac-HistoneH4的影響，運用免疫組織細胞化學(xué)觀察Raji細胞HDAC1，HDAC3，HDAC8和Ac-HistoneH4的蛋白的表達。 結(jié)果：(1)

10、姜黃素對Raji細胞可明顯增殖抑制作用。(2)25μmol/L姜黃素作用Raji細胞24h，免疫組織細胞化學(xué)結(jié)果顯示HDAC1，HDAC3，HDAC8的吸光度與未處理組相比較，明顯下降(p＜0.05)；(3)25μmol/L姜黃素作用Raji細胞24h，免疫組織細胞化學(xué)結(jié)果顯示Ac-HistoneH4的吸光度與未作用組相比較，明顯增加(p＜0.05)；(4)6.25，12.5和25μmol/L姜黃素處理Raji細胞24h，免疫印跡檢測顯