芳香化酶和白細(xì)胞介素6在子宮內(nèi)膜癌雌激素原位合成中正向反饋環(huán)路的機(jī)制研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌是婦科惡性腫瘤中最常見的腫瘤，美國2014年數(shù)據(jù)統(tǒng)計每年發(fā)病人數(shù)達(dá)49560，死亡人數(shù)8190。無孕激素拮抗的持續(xù)雌激素刺激對于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展起著重要的作用。雄烯二酮和睪酮向雌激素的轉(zhuǎn)化是由芳香化酶P450催化的。雖然絕經(jīng)后婦女的體內(nèi)雌激素水平較低，但是腫瘤內(nèi)局部雌激素的合成會導(dǎo)致腫瘤的高雌激素水平。對于正常和異常子宮內(nèi)膜的研究，已有結(jié)果證實(shí)，芳香化酶的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并且只有間質(zhì)表達(dá)的芳香化酶與患者的

2、不良預(yù)后呈正相關(guān)。有學(xué)者用子宮內(nèi)膜癌的上皮-間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)模型，證明了腫瘤和間質(zhì)的相互作用促進(jìn)了芳香化酶活性的上調(diào)。但是針對于腫瘤-間質(zhì)的治療方案有待于確定具體的橋梁因子，迄今為止，在子宮內(nèi)膜癌微環(huán)境中具體的作用因子還未見報道。
　　Interleukin6(IL-6)是一種在多種生理和病理過程中扮演重要角色的多功能細(xì)胞因子。已有研究證實(shí)IL-6的產(chǎn)生與多種惡性腫瘤包括子宮內(nèi)膜癌密切相關(guān)。IL-6在乳腺癌、宮頸癌和非小細(xì)胞肺癌中都

3、可以誘導(dǎo)芳香化酶的表達(dá)。但I(xiàn)L-6在子宮內(nèi)膜癌中是否誘導(dǎo)芳香化酶的表達(dá)還未知曉。我們在前期工作中發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中，雌激素可以通過GPR30通路誘導(dǎo)IL-6的表達(dá)，同時也有證據(jù)顯示雌二醇(17β-estradiol，E2)可以通過雌激素受體(estrogen receptorα，ERα)下調(diào)IL-6的產(chǎn)生，說明IL-6是雌激素的一個重要調(diào)節(jié)靶基因。
　　基于以上的研究結(jié)果，本課題中我們探討了子宮內(nèi)膜癌中，存在于E2，IL-6和芳香

4、化酶之間的一個正向反饋環(huán)路，即E2誘導(dǎo)了子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞IL-6的產(chǎn)生，IL-6通過旁分泌的作用刺激了間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶的表達(dá)，從而促進(jìn)了腫瘤局部雌激素的合成。這個環(huán)路中同時包含了ERα和核因子-kappa B(NF-κB)的參與。IL-6受體（IL-6 receptor，IL-6R）的單克隆抗體(anti-IL-6 receptor antibody，IL-6R Ab)可以阻斷IL-6的信號通路，從而作為一種實(shí)驗(yàn)性的治療方法。我們在

5、細(xì)胞共培養(yǎng)和子宮內(nèi)膜癌原位移植的模型中，證實(shí)了這一環(huán)路的存在和IL-6RAb的治療作用。這一研究為子宮內(nèi)膜癌局部雌激素合成闡明了新的機(jī)制，同時針對這一機(jī)制提出了新的治療方案。
　　本課題共分三個部分:①子宮內(nèi)膜組織中IL-6和芳香化酶的表達(dá)檢測;②子宮內(nèi)膜癌上皮及間質(zhì)細(xì)胞中IL-6和芳香化酶表達(dá)的調(diào)節(jié);③細(xì)胞共培養(yǎng)和裸鼠原位移植模型中雌激素原位合成的正向反饋環(huán)路。
　　第一部分子宮內(nèi)膜組織中IL-6和芳香化酶的表達(dá)檢測

6、>　　目的: 檢測IL-6和芳香化酶在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)，探討兩者之間的相關(guān)性及其與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系。
　　方法: 應(yīng)用免疫組織化學(xué)和免疫熒光的方法，檢測IL-6和芳香化酶在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及定位。
　　結(jié)果: 子宮內(nèi)膜癌組織中，IL-6和芳香化酶的表達(dá)明顯高于正常的子宮內(nèi)膜組織(P＜0.01)。而且只有間質(zhì)內(nèi)芳香化酶的表達(dá)與上皮內(nèi)IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.459，P＜0.001）

7、。上皮內(nèi)芳香化酶的表達(dá)與IL-6無明顯相關(guān)性(r=0.039，P=0.732)。免疫熒光顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中上皮內(nèi)IL-6與間質(zhì)內(nèi)芳香化酶存在共定位。
　　結(jié)論: IL-6和芳香化酶在子宮內(nèi)膜癌組織中過度表達(dá)，且只有間質(zhì)內(nèi)芳香化酶的表達(dá)與上皮內(nèi)IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)。提示兩者通過腫瘤局部微環(huán)境的相互作用，對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展起到了一定的促進(jìn)作用。
　　第二部分子宮內(nèi)膜癌上皮及間質(zhì)細(xì)胞中IL-6和芳香化酶表達(dá)的調(diào)節(jié)

8、>　　目的: 檢測子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞中E2對IL-6和間質(zhì)細(xì)胞中IL-6對芳香化酶表達(dá)的調(diào)節(jié)，并探討其中的具體機(jī)制。
　　方法: 原代提取子宮內(nèi)膜癌的間質(zhì)細(xì)胞，應(yīng)用real-time RT-PCR，western blot，ELISA，芳香化酶活性分析，雌激素濃度放射免疫測定，免疫熒光，免疫共沉淀等方法，檢測IL-6和芳香化酶的表達(dá)變化并探討其中機(jī)制。
　　結(jié)果: 用E2刺激Ishikawa，RL95-2和HEC-1B三種子

9、宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)E2通過轉(zhuǎn)錄因子ERα和NF-κB的協(xié)同作用促進(jìn)了IL-6的表達(dá)(P＜0.01)。用IL-6刺激子宮內(nèi)膜癌的間質(zhì)細(xì)胞，間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶的表達(dá)及活性均明顯上調(diào)（P＜0.01），且IL-6R Ab可以阻斷這一表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論: 通過細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)，提示在子宮內(nèi)膜癌局部可能存在著一種正向反饋環(huán)路，即E2誘導(dǎo)了子宮內(nèi)膜癌上皮IL-6的產(chǎn)生，IL-6通過旁分泌的作用刺激了間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶的表達(dá)，從而促進(jìn)了腫瘤局部雌

10、激素的合成。
　　第三部分細(xì)胞共培養(yǎng)和裸鼠原位移植模型中雌激素原位合成的正向反饋環(huán)路
　　目的: 通過兩種細(xì)胞共培養(yǎng)和裸鼠原位移植模型，進(jìn)一步證實(shí)由IL-6和芳香化酶參與的正向反饋環(huán)路的存在。
　　方法: 通過子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞接觸和非接觸性共培養(yǎng)的方法，檢測芳香化酶的表達(dá)和雌激素的合成情況。應(yīng)用裸鼠原位移植模型，檢測IL-6RAb對于腫瘤局部雌激素合成及其生長的影響。
　　結(jié)果: 用E2刺激過的子宮內(nèi)

11、膜癌細(xì)胞株與間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)后，間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶表達(dá)明顯上調(diào)，同時培養(yǎng)基內(nèi)E2濃度升高(P＜0.01)。而用IL-6R Ab可以阻斷這一正反饋環(huán)路。成功建立裸鼠子宮內(nèi)膜癌原位移植模型，E2刺激組裸鼠腫瘤體積明顯要大于對照組，用IL-6R Ab治療后，腫瘤體積明顯減小(P＜0.01)。
　　結(jié)論: 通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，IL-6和芳香化酶參與了腫瘤局部微環(huán)境中雌激素的合成，且IL-6R Ab對于子宮內(nèi)膜癌具有一定的治療作用。