糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞活化與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損害的研究.pdf

1、糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜 小膠質(zhì)細(xì)胞活化與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損害的研究 目的：本研究通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞的活化特征及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglioncell，RGC)損害，了解小膠質(zhì)細(xì)胞參與神經(jīng)元損害的過(guò)程。 方法：體重為250—300g的成年雄性SD(Sprague—Dawley)大鼠共20只，隨機(jī)抽取10只大鼠采用鏈脲佐菌霉素(streptozotocin，STZ)腹腔注射方法制

2、作糖尿病動(dòng)物模型，根據(jù)糖尿病成模時(shí)間將大鼠隨機(jī)分為糖尿病1月組及糖尿病3月組，每組各5只。10只大鼠做為相應(yīng)對(duì)照組，每組各5只。取標(biāo)本前1月使用脂溶性碳氰染料DiI(1，r—dioctadecyl一3，3，3’，3'-tetramethy1indocarbocyanineperchlorate)對(duì)全部實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠行上丘定位注射逆行標(biāo)記RGC細(xì)胞。取大鼠眼球制備視網(wǎng)膜鋪片和冰凍切片，采用免疫組化方法分別標(biāo)記視網(wǎng)膜鋪片、冰凍切片小膠質(zhì)

3、細(xì)胞和RGC。在共聚焦顯微鏡下采集照片。觀察小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)，分布特征，發(fā)生吞噬的細(xì)胞分布位置。計(jì)數(shù)并計(jì)算視網(wǎng)膜鋪片RGC層小膠質(zhì)細(xì)胞密度，發(fā)生吞噬的小膠質(zhì)細(xì)胞密度，冰凍切片視網(wǎng)膜各層小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)及RGC個(gè)數(shù)。 結(jié)果：糖尿病組視網(wǎng)膜鋪片小膠質(zhì)細(xì)胞胞體增粗，局部呈卵圓形隆起，分支減少，形態(tài)更加不規(guī)則，胞體包繞RGC。對(duì)各組RGC層發(fā)生吞噬的小膠質(zhì)細(xì)胞密度進(jìn)行組間比較發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比糖尿病大鼠1月組RGC層發(fā)生吞噬的小膠質(zhì)細(xì)胞密

4、度無(wú)顯著性差異(P>0．05)；與對(duì)照組相比糖尿病大鼠3月組RGC層發(fā)生吞噬的小膠質(zhì)細(xì)胞密度顯著增加(P0．05)。對(duì)各組RGC層小膠質(zhì)細(xì)胞平均密度進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比糖尿病大鼠1月組及3月組RGC層小膠質(zhì)細(xì)胞平均密度均顯著增加(P<0．05)；糖尿病大鼠3月組RGC層小膠質(zhì)細(xì)胞平均密度較糖尿病大鼠1月組有顯著增加(P<0．0001)

5、。對(duì)各組小膠質(zhì)細(xì)胞在視網(wǎng)膜各層的分布進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比糖尿病大鼠1月組A層和B層小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P<0．05)；糖尿病大鼠3月組與糖尿病大鼠1月組相比D層小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P<0．05)；糖尿病大鼠3月組A層小膠質(zhì)細(xì)胞和D層小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組顯著增加(P<0．001，P<0．05)。冰凍切片RGC計(jì)數(shù)顯示：與對(duì)照組相比糖尿病大鼠1月組及3月組RGC數(shù)均顯著減少(P<0．05，P<0．001)；糖尿病大鼠3月組R

6、GC數(shù)較糖尿病大鼠1月組顯著減少(P<0．05)。糖尿病早期小膠質(zhì)細(xì)胞與RGC數(shù)量之間存在相關(guān)關(guān)系(P<0．05)。 結(jié)論：糖尿病早期小膠質(zhì)細(xì)胞活化與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷關(guān)系密切。1)糖尿病早期RGC層小膠質(zhì)細(xì)胞即發(fā)生顯著活化，表現(xiàn)為數(shù)量顯著增加，形態(tài)改變，吞噬活躍。2)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞活化反應(yīng)主要表現(xiàn)在數(shù)量的顯著增加，其吞噬活動(dòng)可能并未隨著RGC數(shù)量的顯著減少而明顯增強(qiáng)。3)糖尿病早期視網(wǎng)膜外層小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加以及吞噬RGC的小膠