大鼠骨髓間充質干細胞包膜下移植對梗阻腎病變影響的初步研究.pdf

1、目的：培養(yǎng)高純度骨髓間充質干細胞(BM-MSCs)并鑒定，完善包膜下移植技術內容，從炎癥及纖維化水平兩個角度初探間充質干細胞(MSCs)包膜下移植對梗阻腎的安全性和有效性。
　　 方法：采用改良貼壁法培養(yǎng)BM-MSCs，觀察其貼壁性能，利用流式細胞儀在P2代時測定細胞表型以鑒定。采用V管卡壓法建立大鼠可復性單側輸尿管梗阻(R-UUO)模型，從細針、微量注射器以及均勻安排注射點三個方面建立大鼠腎包膜下移植的技術內容。免疫組化檢測腎

2、臟抗巨噬細胞單克隆抗體(ED-1)表達水平及位置，Masson染色檢測膠原沉積量。使用IPP軟件分析ED-1平均光密度，以及Masson陽染區(qū)域占整個切片的面積比。根據(jù)正態(tài)性檢驗結果，采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗進行組間比較，均以SPSS軟件進行數(shù)據(jù)分析。
　　 結果：1.分離所得細胞具典型成纖維樣細胞形態(tài)，貼壁；細胞表型檢測結果為：CD29陽性率99.6％，CD34陰性率98.6％，CD44陽性率68.1％，CD45陽性率9

3、9.9％，CD90陽性率94.9％。2.V管卡壓法可順利建立大鼠R-UUO模型，梗阻成功率為98.6％(69/70)，復通成功率為81.2％(56/69)，總建模成功率為80％(56/70)。3.使用極細針結合微量注射器，均勻安排注射點于腎臟冠狀位中切線兩側，可有效進行MSCs的包膜下移植。4.MSCs包膜下移植組和對照組比較，ED-1表達水平在14天時有顯著差異，膠原沉積量面積比在各時間點均無顯著差異。5.包膜下注射的兩組和損傷對照組

4、比較，后者ED-1表達水平低于另外兩組，其中在14天時和對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在膠原沉積量的比較中無顯著差別(P>0.05)。6.隨病程變化，損傷對照組內ED-1表達水平一直呈下降趨勢，14天組和另外兩組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，穿刺兩組內各時間點比較無差異。膠原沉積量在各組內均有下降，其中對照組和損傷對照組差別有顯著性(P<0.05)。
　　 結論：1.改良貼壁法可分離、培養(yǎng)獲得高純度骨髓間充質干細胞