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文檔簡介
1、目的:評估m(xù)iR-363在不同腎組織和不同腎細胞株之間的表達差異，初步判斷miR-363在腎癌的發(fā)生和進展中可能扮演的角色，同時利用Targetscan預測miR-363的靶基因為后續(xù)的功能研究做準備。
材料和方法:收集中國人民解放軍總醫(yī)院37例配對的腎透明細胞癌腫瘤與癌旁組織標本。培養(yǎng)正常人腎近曲小管上皮細胞株HKC、HK2和人胚腎細胞系293T以及腎透明細胞癌細胞株786-O、769P、Caki-1、SN12-PM6。逆轉(zhuǎn)
2、錄miR-363為cDNA模板，熒光定量PCR采用SYBER Green染料法比較Ct值。Targetscan預測miR-363的靶基因，熒光素酶實驗驗證，檢測其在腫瘤與瘤旁組織中的mRNA表達差異。
結果:miR-363在瘤旁組織中較腫瘤組織中高表達，且具有統(tǒng)計學意義。miR-363在正常細胞株HKC、HK2中較腫瘤細胞株769P、786O、Caki-1和SN12-PM6高表達。軟件預測其靶基因為FNIP1，熒光素酶實驗表明
3、，miR-363能夠通過作用于FNIP1基因的3'-UTR的特定位點，對其表達進行負性調(diào)節(jié)。FNIP1在瘤旁組織中較腫瘤組織中低表達，且具有統(tǒng)計學意義。FNIP1在腫瘤細胞株769P、786O、Caki-1和SN12-PM6較正常細胞株HKC、HK2中高表達。
結論:miR-363可能在腎癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，抑制腎癌發(fā)生，熒光素酶實驗表明，miR-363能夠通過作用于FNIP1基因的3'-UTR的特定位點，對其表達
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