石椒草提取物對桔全爪螨和朱砂葉螨的生物活性及其作用機理研究.pdf

1、植食性螨類因其個體小、危害隱蔽而很難被發(fā)現(xiàn)，加之大量廣譜性殺蟲劑的應(yīng)用殺死了害螨天敵，致使螨類危害加重。目前螨類防治措施仍以化學(xué)防治為主，在殺死害螨的同時也污染了環(huán)境，破壞了生態(tài)平衡。隨著可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展觀的興起，綠色環(huán)保型的植物源殺螨劑已是新農(nóng)藥研究開發(fā)的趨勢。本研究通過對15個科20種植物乙醇提取物對桔全爪螨(Panonychus citri McGregor)的觸殺活性測定，篩選出有較高生物活性的石椒草(Boenninghausen

2、ia sessilicarpa Levi.)，其后以石椒草為試材，桔全爪螨和朱砂葉螨[Tetanychus cinnabarinus(Boisduval)]為研究對象，較系統(tǒng)地研究了石椒草提取物對桔全爪螨和朱砂葉螨的生物活性及作用機理，并對其活性成分進行初步的分離純化及生物活性檢測。獲得如下研究結(jié)果： 1、通過對15個科20種植物乙醇提取物對桔全爪螨成螨的觸殺活性測定，發(fā)現(xiàn)臭靈丹、石椒草、香茶菜和葎草提取物處理的螨校正死亡率均達

3、到80％以上，與其他提取物差異達到顯著水平，經(jīng)進一步的生物活性測定表明石椒草提取物的殺螨活性最好，致死中濃度為0.9241 mg·ml<'-1>；通過對桔全爪螨螨卵和若螨生物活性測定表明，石椒草乙醇提取物對螨卵和若螨亦有較強的觸殺活性，其對卵、若螨的致死中濃度分別為1.7032 mg·ml<'-1>、0.7878mg·ml<'-1>。 2、本文采用了兩種提取程序?qū)κ凡葜械臍Ⅱ钚猿煞诌M行提取。在觸殺活性測定中，通過玻片法發(fā)現(xiàn)：

4、在4種不同極性的有機溶劑(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇)的梯度提取物中，以乙醇提取物和乙酸乙酯提取物的觸殺活性最強，當(dāng)提取物濃度為4mg·ml<'-1>時，24h對桔全爪螨的校正死亡率分別達到了94.68％、93.03％，明顯高于其他2種溶劑提取物。在平行提取中，以乙醇提取物的觸殺活性最強，當(dāng)提取物濃度為4mg·ml<'-1>時，24h對桔全爪螨的校正死亡率達到了91.67％，而乙酸乙酯提取物則為54.19％，說明乙醇是石椒草殺螨活性物

5、質(zhì)的最佳提取溶媒。 3、采用3種生物測定方法(玻片浸漬法、噴霧法、內(nèi)吸作用)研究石椒草乙醇提取物對桔全爪螨成螨的生物活性。表明玻片浸漬法效果最好，校正死亡率為92.31％；噴霧法次之，為82.05％；內(nèi)吸作用最差，為6.67％；說明石椒草提取物主要以觸殺作用方式為主。 4、石椒草乙醇提取物經(jīng)萃取，以水的萃取率最高，達到了50.66％，氯仿和石油醚次之，分別為24.74％和18.17％，乙酸乙酯的萃取率最低，僅為5.79％

6、。4種萃取物經(jīng)觸殺活性測定，以乙酸乙酯層觸殺活性最強，對桔全爪螨成螨、若螨和卵的I.,C50分別為0.7639mg·ml<'-1>、0.3226 mg·ml<'-1>和1.1033 mg·ml<'-1>；對朱砂葉螨成螨、若螨和卵的L,C50分別為1.0113 mg·ml<'-1>、0.8451 mg·ml<'-1>和1.5652 mg·ml<'-1>。石油醚層對桔全爪螨和朱砂葉螨的LC<,50>分別為3.4930 mg·ml<'-1>和

7、3.2762 mg·ml<'-1>，氯仿層分別為1.4951mg·ml<'-1>、2.1010mg·ml<'-1>，水相分別為3.8843mg·ml<'-1>和4.7940 mg·ml<'-1>。 5、乙酸乙酯萃取物經(jīng)柱層析分離后，經(jīng)TLC檢驗，合并相同成分，得14個組分，再經(jīng)殺螨殺卵生物活性測定，組分2的生物活性最強，對桔全爪螨和朱砂葉螨成螨的LC<,50>分別為0.2662 mg·ml<'-1>、0.1897mg·ml<'-

8、1>。 6、用葉碟法測試了流分2對桔全爪螨生長發(fā)育影響，結(jié)果表明組分2能抑制桔全爪螨發(fā)育，而且濃度越高，抑制作用越強烈，當(dāng)濃度為1mg·ml<'-1>和0.5 mg·ml<'-1>時抑制作用很明顯，6d后卵孵化率分別為O％、5.28％，對照為55.13％。對雌成螨的繁殖力影響也表明：乙醇提取物和流分2具有明顯的產(chǎn)卵抑制作用，這種作用隨著濃度的降低而降低，濃度為2.5 mg·ml<'-1>時，12h和24h產(chǎn)卵抑制指數(shù)分別為0.7

9、850、0.6816；當(dāng)濃度為0.5mg·ml<'-1>時，產(chǎn)卵抑制指數(shù)皆為0。 7、初步的作用機理表明：石椒草提取物對桔全爪螨體內(nèi)的蛋白質(zhì)有顯著的抑制作用；對其體內(nèi)的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶有激活的作用；對羧酸酯酶有明顯的抑制作用：而過氧化物酶的活性與對照接近，說明其對桔全爪螨體內(nèi)的過氧化物酶抑制作用不顯著。 本研究在對20種植物乙醇提取物對桔全爪螨觸殺活性的基礎(chǔ)上，篩選出殺螨活性高的石椒草，對石椒草殺螨活性成分進行了萃取