原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜和絨毛組織中SSTR-1、SSTR-2、E-Cad的表達(dá)及意義.pdf

1、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上的自然流產(chǎn)，且大部分的流產(chǎn)都發(fā)生在早孕未檢測(cè)到胎心之前。RSA病因復(fù)雜，常見的病因有感染因素、生殖道解剖異常、環(huán)境理化因素、染色體異常等。但仍有50％的RSA患者病因尚不明確，稱為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)。生殖免疫學(xué)認(rèn)為，胚胎攜

2、帶1/2有異于母體的組織抗原，妊娠類似同種異體移植。流產(chǎn)則被認(rèn)為是妊娠婦女對(duì)胚胎免疫排斥的結(jié)果，進(jìn)而導(dǎo)致同種異體移植的失敗。
　　 在免疫系統(tǒng)中，T淋巴細(xì)胞是最重要的適應(yīng)性免疫應(yīng)答細(xì)胞之一。成熟的T細(xì)胞按其CD分子表型分為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞。初始的CD4+T細(xì)胞分化為Th1、Th2和Th3三類效應(yīng)Th細(xì)胞，分別分泌不同的細(xì)胞因子，發(fā)揮不同的免疫效應(yīng)。正常妊娠時(shí)Th1/Th2型細(xì)胞因子間保持動(dòng)態(tài)的平衡，但以Th2型細(xì)胞

3、因子占優(yōu)勢(shì)，即所謂的“Th2偏離”。在正常狀態(tài)下，體內(nèi)Th1和Th2型細(xì)胞因子處于動(dòng)態(tài)平衡，維持正常的細(xì)胞和體液免疫功能。Th1細(xì)胞通過分泌IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞介導(dǎo)的抗感染免疫，特別是抗細(xì)胞內(nèi)寄生菌的感染。Th1型細(xì)胞因子對(duì)胚胎著床、生長(zhǎng)、發(fā)育以及胎兒生存都是有害的；Th2細(xì)胞則是通過分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10，增強(qiáng)B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答。Th2型細(xì)胞因子在妊娠中起免疫營(yíng)養(yǎng)作用，使妊娠得以成功

4、進(jìn)行。Th1和Th2型細(xì)胞因子之間相互抑制、相互調(diào)節(jié)共同構(gòu)成母胎免疫界面微環(huán)境，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)來維持正常妊娠的平衡狀態(tài)，該平衡被打破后會(huì)導(dǎo)致病理性妊娠。Th1/Th2失衡是URSA的重要特征。
　　 整個(gè)妊娠期間，在卵巢激素控制下，子宮內(nèi)膜分泌許多促進(jìn)胚胎著床、生長(zhǎng)和發(fā)育的細(xì)胞因子、粘附分子及各種離子，使子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎具有接受性。一旦這種正常的內(nèi)分泌功能失調(diào)，適宜的微環(huán)境被破壞，就會(huì)導(dǎo)致妊娠婦女對(duì)胚胎免疫的排斥，導(dǎo)致同種異

5、體移植失敗----流產(chǎn)。
　　 Th1/Th2失衡和子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎接受性降低都是URSA的重要特征。SSTR通過與生長(zhǎng)抑素(SS)結(jié)合，分別或同時(shí)通過以下幾種作用方式如：①通過抑制生長(zhǎng)激素的釋放，抑制正常細(xì)胞、胚胎細(xì)胞的正常著床、生長(zhǎng)、發(fā)育，促進(jìn)胚胎細(xì)胞的凋亡；②通過激活MAPK通路，阻滯細(xì)胞周期從G1期向S期轉(zhuǎn)化進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖，促進(jìn)和加速滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡；③上調(diào)PTP活性，使酪氨酸激酶去磷酸化而失活或通過對(duì)功能性PKC-δ、

6、c-src的調(diào)節(jié)，抑制ERK活性引起細(xì)胞分裂停止進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡；④通過刺激特異性Th1細(xì)胞系分泌IL-4，特異性Th2細(xì)胞系分泌IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10，打破Th1/Th2型細(xì)胞因子間的動(dòng)態(tài)平衡。參與免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)、降低淋巴細(xì)胞活性、影響細(xì)胞因子分泌、調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化和功能、抗炎、抗增殖作用。SSTR與SS結(jié)合后可以通過抑制胚胎的發(fā)育、分化、增殖和促細(xì)胞凋亡，引起URSA的發(fā)生；也可以通過打破Th1/Th2

7、型細(xì)胞因子間的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致URSA的發(fā)生。
　　 E-cad介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附，通過細(xì)胞內(nèi)成分與胞漿內(nèi)的連環(huán)蛋白相互作用，形成E-cad/catenin復(fù)合體，并與細(xì)胞骨架相連。E-cad不僅可以起到細(xì)胞骨架的作用，還是調(diào)節(jié)細(xì)胞之間，細(xì)胞與基質(zhì)之間粘附反應(yīng)的重要媒介。對(duì)維持組織結(jié)構(gòu)形態(tài)起重要作用。尤其在上皮細(xì)胞間連系和器官發(fā)生、分化等方面起著重要作用，具有特殊生物學(xué)特性。E-cad蛋白的低表達(dá)及其分泌的降低，使子宮內(nèi)膜合體滋養(yǎng)層

8、細(xì)胞和腺體細(xì)胞分泌功能降低。許多正常妊娠所必須的細(xì)胞因子、粘附分子及各種離子的缺少，影響植入期子宮內(nèi)膜容受性、粘附性、胚泡的粘附、著床和發(fā)育，與URSA的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 SSTR-1、SSTR-2、E-Cad蛋白在絨毛和蛻膜組織中的表達(dá)與Th1/Th2平衡、子宮內(nèi)膜的容受性均有密切的關(guān)系；本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)URSA患者蛻膜和絨毛組織中SSTR-1、SSTR-2、E-Cad蛋白的表達(dá)以及分析兩者之間存在的相關(guān)性，

9、探討SSTR-1、SSTR-2、E-Cad蛋白的表達(dá)與URSA發(fā)生的可能作用機(jī)制。
　　 目的
　　 1研究URSA患者蛻膜和絨毛組織中SSTR-1、SSTR-2、E-Cad蛋白的表達(dá)。探討SSTR-1、SSTR-2、E-Cad蛋白與Th1/Th2平衡、子宮內(nèi)膜容受性以及與URSA的相關(guān)性。
　　 2從內(nèi)分泌和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路共同探討SSTR-1、SSTR-2、E-Cad蛋白與URSA有關(guān)的作用機(jī)制。
　　

10、材料與方法
　　 1研究對(duì)象及分組
　　 URSA組(30例)為2008年10月至2009年4月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科門診就診的URSA患者(其中流產(chǎn)3次者23例，4次及4次以上者7例)。年齡25-35歲，平均(31.79±0.79)歲；孕周8±2周，平均(8.32±1.09)周；研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：排除解剖、遺傳、內(nèi)分泌、感染等因素，已發(fā)生原因不明流產(chǎn)3次或3次以上，現(xiàn)已妊娠。經(jīng)臨床病史、體征、B超、HCG檢測(cè)確定已

11、經(jīng)發(fā)生難免流產(chǎn)或胚胎停止發(fā)育者。
　　 對(duì)照組(30例)為同期因計(jì)劃外妊娠要求進(jìn)行人工流產(chǎn)的孕婦。年齡25-35歲，平均(28.14±0.51)歲，孕周8±2周，平均(8.15±0.15)周；研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：既往無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史、均有過正常妊娠和分娩史。本次妊娠期間無服藥史及病毒感染史，無先兆流產(chǎn)癥狀；B超提示胚胎發(fā)育正常。
　　 URSA組與對(duì)照組標(biāo)本的收集均得到患者的知情同意。
　　 2標(biāo)本處理和實(shí)

12、驗(yàn)方法
　　 收集兩組婦女人工流產(chǎn)術(shù)后新鮮絨毛和蛻膜組織(吸出后5min內(nèi))，生理鹽水沖洗去掉血液后，10％中性甲醛分別固定6-24h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，每個(gè)標(biāo)本均作4mm連續(xù)切片。至75℃烤箱0.5h，常規(guī)HE染色，分別觀察絨毛和蛻膜組織形態(tài)。載玻片涂以防脫片劑多聚賴氨酸，經(jīng)脫蠟、水化、微波抗原修復(fù)，按標(biāo)準(zhǔn)程序操作采用免疫組化進(jìn)行定性及半定量測(cè)定蛻膜和絨毛組織中SSTR-1、SSTR-2、E-cad蛋白的表達(dá)情況。
　

13、　 3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)值變量參數(shù)以(?)±s表示，組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)；同一指標(biāo)不同組的兩個(gè)均數(shù)間比較采用(least significant difference，LSD)檢驗(yàn)，指標(biāo)間直線間采用pearson相關(guān)分析進(jìn)行相關(guān)性分析，以α=0.05作為顯著檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 1研究對(duì)象一般情況比較：URSA組和對(duì)照組相比

14、，年齡和孕周差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)。
　　 2 SSTR-1、SSTR-2在兩組絨毛組織中的表達(dá)：SSTR-1、SSTR-2主要表達(dá)在絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿。URSA組表達(dá)高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　 3 SSTR-1、SSTR-2在兩組蛻膜組織中的表達(dá)：SSTR-1、SSTR-2主要表達(dá)在蛻膜腺體細(xì)胞的胞漿。URSA組表達(dá)高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　 4 E-cad在兩組絨毛組織中的表達(dá)：E-

15、cad主要表達(dá)在絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞的胞膜。對(duì)照組表達(dá)高于URSA組(P＜0.01)。
　　 5 E-cad在兩組蛻膜組織中的表達(dá)：蛻膜腺體細(xì)胞的胞膜。對(duì)照組表達(dá)高于URSA組(P＜0.01)。
　　 6 URSA組母胎界面上的絨毛和蛻膜組織中SSTR-1與E-Cad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。絨毛組織：(r=-0.315，P＜0.05)；蛻膜組織：(r=-0.369，P＜0.05)。
　　 7 URSA組母胎界面上的絨毛和蛻膜組織

16、中SSTR-2與E-Cad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。絨毛組織：(r=-0.300，P＜0.05)；蛻膜組織：(r=-0.358，P＜0.05)。
　　 8 URSA組母胎界面上的絨毛和蛻膜組織中SSTR-1與SSTR-2的表達(dá)正相關(guān)。絨毛組織：(r=0.796，P＜0.05)；蛻膜組織：(r=0.336，P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1 URSA組絨毛和蛻膜組織中SSTR-1、SSTR-2蛋白高表達(dá)，E-cad蛋白低