番茄親本與F1的RAPD分析及相關性分析.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文番茄親本與F1的RAPD分析及相關性分析姓名：楊永超申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導教師：李煥秀20070601T h e R A P D A n a l y s i sa n d C o r r e l a t i o n A n a l y s i s o nT o m a t o I n b r e dL i n e sa n d H y b r i dP r o g e n i e s F 1Y a n

2、 g Y o n g - c h a o ( O l e r i c u l t u r e )D i r e c t e db y P r o f ．L iH u a n - x i u( F o r e s t r ya n dH o r t i c u l t u r a l C o l l e g e ，S i c h u a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ，Y a ’a

3、 n 6 2 5 0 1 4 ，C h i n a )A b s t r a c tT w e n t y t w o t o m a t o m a t e r i a l sw e r ea d o p t e d a n d t h e i r a g r o n o m i c t r a i t sa n dq u a l i t yw e r e s u r v e y e d ．C T A Bw a s a p p l i

4、 e dt oe x t r a c t i o nm a t e r i a l s ’D N A ，t h e n ，t h er e a c t i o no fR A P D ，t h e c o n c e n t r a t i o no fa g e n tt h a tr e f e r r e dt o t h eR A P Da n dc o n c e n t r a t i o no fa g a r o s e

5、 w e r e o p t i m i z e d ．T h e r e s u l t sa r e ∞f o l l o w s ：1 ．T h ei m p r o v e dC T A B W a S a p p l i e d t oe x t r a c tD N A ．T h e r a t i oo f O D 2 6 0 ／O D 2 8 0W a S f r o m 1 ．8 t o2 ．0a n d O D 2

6、6 0 ／O D 2 3 0w a s m o r e t h a n2 ．F u r t h e r m o r e ，t h er e s u l t so fe l e e t r o p h o r e s i sw a sc l e a r ．A l la b o v ei n d i c a t e dt h a tt h eD N A W a sq u a l i f i e df o rR A P Da n a l y

7、s i s ．2 ．O r t h o g o n a le x p e r i m e n t d e s i g n W a su s e d f o r s e a i n gu p o p t i m i z e dR A P Dr e a c t i o n ．E a c hs a m p l eW a Sa m p l i f i e d i n a r e a c t i o nm i x t u r e ( 2 5u L

8、 i nt o t a l v o l u m e ) c o n t a i n i n g4 0 n g t e m p l a t e D N A , 2 0 0 p m o I ／L , d e o x y n u c l e o s i d e t r i p h o s p h a t e ( S B S ) , 1 ．2 5 U o f r a qp o l y m e r a s e ，5p Lo f1 0 ×

9、P C Rb u f f e r , 1 ．5 1 ．t L o fM g C l 2a n d 1 4 p ．L o fd d H 2 0 ．T h er e a c t i o nm i x t u r e w a S c y c l e d t h r o u g ht h ef o l l o w i n gt e m p e r a t u r ep r o f i l e s ：9 4 “ C f o r5 r a i n

10、，9 4 “ Cf o r3 0 s( p r e d e n a t u r a t i o n ) ，3 6 “ ( 2 f o r 3 0 s ，a n d 7 2 “ C f o r l m i n f o r 4 0 c y c l e s ．T h eP C RW a st e r m i n a t e d a t7 2 ℃f o r 7 m i n ．3 ．B o t hc o n c e n t r a t i o n

11、 s 1 ．6 ％a n d2 ．O ％o f a g a r o s eC a nd i s t i n g u i s hv a r i o u sD N A ．b u t1 ．6 ％W a sa d o p t e d f o rt h e s a k eo f c o s t ．4 ．1 1 p r i m e r s w e r es c r e e n e do u t o f4 0p r i m e r s ．T h e

12、11 p r i m e r s a m p l i f i e d7 4D N A f r a g m e n t s a n d e a c h p r i m e r C a n a m p l i f y 6 ．6 7 f r a g m e n t s ．T h e r e w e r e 6 1p o l y m o r p h i c f r a g m e n t sa m o n g t o t a l7 4f r a

13、 g m e n m ，t h a ta c c o u n t e d f o r8 2 ．4 ％a n de a c hp r i m e r c o u l d a m p l i f y5 ．1p o l y m o r p h i c f r a g m e n t s a v e r a g e ．5 ．T h ec l u s t e ra n a l y s i sa n d r e l a t i o n s h i

14、pa n a l y s i sw e r ec a r r i e do u ta n dt h er e s u l ts h o w e d t h a t t h eh y b r i dp r o g e n i e sF I i n c l i n e dt O m a l ei n b r e dl i n e si nh e r e d i t y ．T h ec o r r e l a t i o na n a l y