新診斷急性粒細(xì)胞白血病剪接因子異常表達(dá)研究.pdf

1、背景：
　　 選擇性剪接是指細(xì)胞選擇性地對(duì)前mRNA剪接位點(diǎn)的組合剪接加工，形成不同的成熟mRNA，從而使一個(gè)基因產(chǎn)生若干具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)和功能的蛋白異構(gòu)體的過(guò)程。最近研究報(bào)道，多達(dá)94％的人類基因都發(fā)生了選擇性剪接，并且該過(guò)程的異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。
　　 大量研究顯示，急性粒細(xì)胞白血病(AML)患者體內(nèi)普遍存在著異常的選擇性剪接，并且這可能是AML發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵分子基礎(chǔ)。目前認(rèn)為，AML中大量存在的異常剪接事

2、件可能與患者體內(nèi)剪接調(diào)控因子發(fā)生的顯著變化密切相關(guān)。最近關(guān)于剪接調(diào)控因子的研究有很多，但遺憾的是到目前為止，還沒(méi)有相關(guān)的研究關(guān)注AML患者體內(nèi)剪接調(diào)控因子的表達(dá)情況。另外，caspase-8是一種關(guān)鍵的凋亡相關(guān)蛋白水解酶，在選擇性剪接作用下，caspase-8 pre-mRNA至少可以產(chǎn)生7種不同的成熟mRNA，進(jìn)而編碼出相應(yīng)的蛋白質(zhì)異構(gòu)體發(fā)揮各自不同的生物學(xué)作用。已有研究報(bào)道，caspase-8在AML中存在異常的剪接行為，并且這與白

3、血病細(xì)胞的抗凋亡密切相關(guān)。
　　 本研究擬用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)新診斷AML患者體內(nèi)8個(gè)剪接調(diào)控因子[7個(gè)SR蛋白家族成員和1個(gè)主要的剪接負(fù)調(diào)節(jié)蛋白，即SRSF1(SF2/ASF)，SRSF2(SC35)，SRSF3(SRp20)，SRSF4(SRp75)，SRSF5(SRp40)，SRSF6(SRp55)，SRSF7(9G8)和hnRNPA1]mRNA水平的變化，以觀察各種剪接因子的特異性變化規(guī)律，探討

4、應(yīng)用qRT-PCR方法檢測(cè)剪接調(diào)控因子表達(dá)水平在AML診斷、預(yù)后和治療中的潛在意義。另一方面擬運(yùn)用凝膠電泳檢測(cè)AML中CASP8的剪接模式，并統(tǒng)計(jì)分析剪接因子mRNA水平的變化與CASP8剪接模式的潛在關(guān)系，以初步探討AML中CASP8發(fā)生異常剪接的機(jī)制，及其在AML治療中潛在的價(jià)值。
　　 方法：
　　 共采集26例新診斷AML患者和26例健康對(duì)照者外周血標(biāo)本，分離單個(gè)核細(xì)胞后提取總RNA，運(yùn)用qRT-PCR方法檢測(cè)8

5、個(gè)剪接調(diào)控因子mRNA相對(duì)表達(dá)量。同時(shí)，運(yùn)用凝膠電泳檢測(cè)CASP8的剪接模式，統(tǒng)計(jì)分析各剪接因子的特異性變化規(guī)律，CASP8剪接模式的變化及剪接因子表達(dá)量與CASP8剪接模式的潛在關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.與健康對(duì)照組相比，新診斷AML患者體內(nèi)剪接因子的表達(dá)發(fā)生了顯著改變，SRSF1，SRSF3和SRSF4mRNA表達(dá)量減低；SRSF1/HNRNPA1比值和SRSF1/SRSF3比值也減低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、r>　　 2.AML中CASP8的剪接模式不同于健康對(duì)照組，CASP8L在AML中表達(dá)較高，CASP8A在對(duì)照組中表達(dá)較高，AML中CASP8L/CASP8A比值高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.在AML中，SRSF3和CASP8L，SRSF3和CASP8L/CASP8A比值，SRSF4和CASP8L之間有顯著相關(guān)性，對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)該相關(guān)性。
　　 結(jié)論：
　　 1.新診斷AML患者體內(nèi)多種剪接因