補腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的現(xiàn)代臨床及實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一章 肺腎氣（陽）虛型哮喘患者炎癥與HPA軸功能狀態(tài)及相關性研究
　　目的:通過對比不同中醫(yī)辨證分型的哮喘患者及正常健康人的血清、誘導痰、唾液、尿液中有關氣道炎癥、HPA軸功能的指標，擬明確肺腎氣（陽）虛型哮喘患者炎癥及HPA軸功能狀態(tài)，為補腎益氣方藥干預哮喘的內在機理研究提供依據(jù)。
　　方法:選取年齡18-65歲，性別不限，現(xiàn)代醫(yī)學診斷為哮喘，中醫(yī)辨證為肺腎氣（陽）虛、肺氣虛、

2、陰虛火旺證;另選取年齡、性別匹配的健康人群作為對照組。同時排除合并肺部其他疾病的患者;一個月內使用糖皮質激素治療的患者。在固定時間點采集所有研究對象外周血、誘導痰、唾液、24h尿液，用Bio-Plex懸液芯片檢測痰上清液和血清中白細胞介素(Interleukin，IL)-6、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor，TNF-α)、轉化生長因子-β(Transforming GrowthFactor-β，TGF-β)、

3、干擾素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)水平等以觀察炎癥情況;同時用放射免疫法檢測血漿及唾液皮質醇，24h尿游離皮質醇(Urinary Free Cortisol，UFC)、17-羥皮質類固醇（尿17-羥）、17-酮類固醇（尿17-酮）等指標以評估HPA軸功能。
　　結果:本研究共收集71例哮喘患者，其中肺腎氣（陽）虛組28例，肺氣虛組23例，陰虛火旺組20例，另選取41名健康體檢者作為正常組。各組患者性別、年齡、體重指

4、數(shù)、吸煙、病程、疾病嚴重程度均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。與正常組、肺氣虛組比較，肺腎氣（陽）虛組、陰虛火旺組血清TNF-α水平明顯升高，而IFN-γ明顯降低(P＜0.05)，肺腎氣（陽）虛組IL-6水平明顯高于其他三組(P＜0.05)。與正常組、肺氣虛組比較，肺腎氣（陽）虛組誘導痰中TNF-α、TGF-β水平明顯升高(P＜0.05)，陰虛火旺組誘導痰IFN-γ明顯降低(P＜0.05)。肺腎氣（陽）虛組尿游離皮質醇、17-羥水平明顯低

5、于其他三組，尿17-酮明顯低于正常組及陰虛火旺組。與正常組、陰虛火旺組相比，肺腎氣（陽）虛組晨8點及次日8點血皮質醇明顯降低(P＜0.05);與正常組比較，肺腎氣（陽）虛組晨8點及次日8點唾液皮質醇明顯降低(P＜0.05)，與陰虛火旺組比較，肺腎氣（陽）虛組次日晨8點唾液皮質醇明顯降低(P＜0.05);肺氣虛組亦出現(xiàn)血漿及唾液中晨8點及次日8點皮質醇水平降低，但與正常組比較無統(tǒng)計學差異。血清TNF-α、IL-6與血漿皮質醇呈明顯的負相關

6、(r=-0.26，P=0.03)、(r=-0.25，P=0.03)，誘導痰IL-6與唾液皮質醇呈明顯的負相關(r=-0.26，P=0.02)。血清IFN-γ與尿17-羥呈明顯的正相關(r=0.21，P=0.03)。
　　結論:哮喘患者致炎因子增多，抑炎因子缺乏，處于致炎/抑炎平衡調控機制失衡狀態(tài)，其中以肺腎氣（陽）虛型哮喘患者改變尤為明顯，可能與其HPA軸功能低下或紊亂有關。
　　第二章 補腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘

7、的臨床療效觀察及內在機理探討
　　目的:通過多中心、隨機、雙盲的臨床試驗，驗證并對比補腎防喘片與補腎益氣方治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的療效，并從炎癥、HPA軸功能角度出發(fā)探討其內在機理，為臨床應用提供循證醫(yī)學證據(jù)。
　　方法:采用前瞻性、多中心、雙盲的隨機對照試驗方法。受試對象來源于5家三級甲等醫(yī)院門診與病房，采用相同的入選和排除標準，將符合標準的哮喘患者隨機分為補腎防喘片組、補腎益氣方組、安慰劑組，三組在現(xiàn)代醫(yī)學基礎治療上，

8、分別加用補腎防喘片與補腎益氣方模擬劑、補腎益氣方與補腎防喘片模擬劑、補腎益氣方模擬劑與補腎防喘片模擬劑，觀察周期為3個月。
　　結果:(1)最終共納入符合標準的患者295例。三組病例治療前資料具有可比性(P＞0.05)。
　　(2)三組服藥前后安全性指標組間比較，P＞0.05，不良事件/不良反應發(fā)生率組間比較，P＞0.05，無嚴重不良事件報告。
　　(3)補腎防喘片、補腎益氣方治療后血EOS明顯下降，但與安慰劑組比較，

9、無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);補腎益氣方治療后血清t IgE有明顯下降趨勢，而補腎防喘片組、安慰劑組治療后升高，組間比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);補腎益氣方治療后IL-2、IL-10水平升高，與補腎防喘片組、安慰劑組比較，有顯著統(tǒng)計學差異(P=0.006，P=0.04);補腎益氣方、補腎防喘片服藥后血清中IFN-γ水平降低，與安慰劑組比較，有統(tǒng)計學差異(P=0.01);補腎益氣方、補腎防喘片治療后血清MMP-9、IL-4、IL-5、

10、IL-13、IL-17水平較服藥前均有明顯下降，且下降幅度比安慰劑組明顯，但組間比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);補腎益氣方治療后血漿CRH、ACTH、皮質醇水平均有明顯升高，補腎防喘片治療后血漿ACTH水平亦有升高的趨勢，而安慰劑組治療后均下降。
　　結論:補腎防喘片可顯著升高FEV1占預計值％，補腎益氣方亦有改善FEV1占預計值％的趨勢;觀察期間由于各組均在吸入糖皮質激素治療的基礎上，補腎防喘片和補腎益氣方減少哮喘急性發(fā)作的作

11、用不明顯，但補腎益氣方與補腎防喘片治療后均有改善肺功能，提高哮喘控制水平，減輕日間哮喘癥狀，提高生活質量，改善肺腎氣（陽）虛證候的作用;機理研究表明降低致炎因子水平，升高抑炎因子水平，糾正致炎/抑炎平衡調控機制失衡，改善HPA軸功能，提高內在抗炎能力可能是補腎防喘片、補腎益氣方治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的內在機理;補腎防喘片與補腎益氣方是治療哮喘安全可靠的中成藥，值得在臨床上推廣應用。
　　第三章 補腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮

12、喘的藥效物質基礎研究
　　目的:利用HPLC-ESI/Q-TOF-MS/MS快速鑒別補腎防喘片中化學成分，結合動物實驗研究，初步明確補腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的活性成分。
　　方法:1.補腎防喘片中化學成分鑒別:采用Agilent Poroshell120-C18反相色譜柱，以乙腈-0.1％甲酸為流動相梯度洗脫;質譜使用ESI，在正離子、負離子、紫外線模式下采集數(shù)據(jù)。
　　2.淫羊藿苷對社交應激性“恐傷腎”致

13、肺腎氣虛哮喘小鼠的干預作用及內在機制探討:將45只Balb/c小鼠按隨機數(shù)字法分為5組，每組9只，即正常組、“恐傷腎”致肺腎氣虛哮喘組、地塞米松干預組、低劑量淫羊藿苷干預組、高劑量淫羊藿苷干預組。各用藥組分別在OVA霧化前30min灌胃給藥，連續(xù)14天。檢測指標同第三章方法2。
　　結果:1.通過正、負離子質譜信息及元素組成分析并結合對照品及相關文獻數(shù)據(jù)對照，共鑒定出淫羊藿苷等18個化學成分;
　　2.曠場試驗結果顯示，與肺

14、腎氣虛哮喘模型組比較，淫羊藿苷組小鼠中央格停留時間延長(P＜0.05)，垂直活動增加(P＜0.05)，水平運動、糞便次數(shù)明顯減少(P＜0.05)，地塞米松干預亦有類似作用，但不如高劑量淫羊藿組改善明顯;肺功能結果提示，與肺腎氣虛哮喘組比較，淫羊藿苷與地塞米松干預組，在Mch高濃度激發(fā)時，RL明顯下降(P＜0.05)，其中以高劑量淫羊藿苷RL下降最明顯;淫羊藿苷與地塞米松治療組可抑制肺腎氣虛哮喘組血清及BALF中炎癥因子水平的升高(P＜0

15、.05)，高劑量淫羊藿苷與地塞米松作用相當或優(yōu)于地塞米松，但兩組之間無統(tǒng)計學差異;淫羊藿苷與地塞米松干預可抑制肺腎氣虛哮喘組血清皮質酮水平升高(P＜0.05);淫羊藿苷與地塞米松干預可明顯減輕肺腎氣虛哮喘組氣道炎細胞浸潤、水腫、上皮損傷情況(P＜0.05)，其中以高劑量淫羊藿苷改善最明顯;淫羊藿苷治療組小鼠體外LPS誘導的脾臟單個核細胞增殖及分泌的細胞因子能被高濃度皮質酮所抑制，而地塞米松干預組此作用不明顯;淫羊藿苷干預后肺組織GR m

16、RNA與GR蛋白表達水平顯著升高(P＜0.01)，呈劑量依賴性，而地塞米松治療組有升高肺腎氣虛哮喘組小鼠肺組織GR蛋白表達的趨勢，但無統(tǒng)計學差異。
　　結論:1.通過高效液相色譜分離，質譜測定相對分子質量及相關文獻數(shù)據(jù)檢索確定補腎防喘片中的18種化學成分，其中淫羊藿苷等5種單體成分來自補腎中藥淫羊藿，這為闡明補腎益氣方藥的藥效物質基礎研究提供了證據(jù)。
　　2.淫羊藿苷對肺腎氣虛哮喘小鼠行為學、AHR、氣道炎癥等指標的改善作用