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文檔簡介
1、目的:
(1)檢測骨髓增生異常綜合征(MDS)、再生障礙性貧血(AA)和免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少癥(IRH患者骨髓中CD4+T細(xì)胞中Foxp3和RORγt的表達(dá)水平;分析調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、Th17細(xì)胞和Treg/Th17在這些疾病中變化的意義。
(2)檢測IRH患者骨髓中CD4+T細(xì)胞中Bcl-6的表達(dá)水平,分析濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)在IRH患者中變化的意義。
方法:
(1
2、)收集2011年1月-2012年3月在蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診或住院病房二系或三系血細(xì)胞減少患者和缺鐵性貧血(IDA)患者骨髓10ml,肝素抗凝。IDA患者作為正常對照組。
(2)密度梯度離心分離骨髓單個核細(xì)胞(BMMNC),免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞。抽提CD4+T細(xì)胞中的總mRNA并逆轉(zhuǎn)成cDNA,采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)(TagMan)檢測Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxp3,Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子RO
3、Rγt,以及Tfh細(xì)胞主要轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6的mRNA表達(dá)水平。
(3)收集所有患者的病史和臨床資料,對疾病進(jìn)行明確診斷。
(4)在MDS患者中,采用直線回歸分析方法分析Treg、Th17細(xì)胞和Treg/Th17與骨髓原始細(xì)胞比例之間的相互關(guān)系。
(5)采用兩樣本均值比較的t檢驗(yàn)分析AA和IRH患者與正常對照組之間Treg/Th17的差異。
(6)采用兩樣本均值比較的t檢驗(yàn)分析IR
4、H和正常對照組之間Bcl-6表達(dá)的差異。
結(jié)果:
(1)MDS患者中,Treg/Th17與骨髓原始細(xì)胞比例高度相關(guān)(r=0.793)。
(2)MDS患者中,骨髓原始細(xì)胞≥5%的MDS患者Th17細(xì)胞水平明顯低于<5%的患者(p=0.007)。
(3)難治/復(fù)發(fā)AA患者的Treg/Th17明顯低于正常對照組和初診AA組(p=0.006;p<0.001)。
(4)IRH組
5、,Tfh細(xì)胞高于正常對照組(p=0.016),Treg/Th17高于正常對照組(p=0.045);
(5)IRH組11117細(xì)胞明顯低于AA組(p<0.001);Treg/Th17明顯高于AA組(p=0.002)。
結(jié)論:
(1)MDS患者,Treg/Th17和骨髓原始細(xì)胞高低正相關(guān),提示Th17細(xì)胞免疫功能受抑與MDS疾病的進(jìn)展有關(guān)。
(2)難治/復(fù)發(fā)AA患者,Treg/Th17
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