磺胺-5-甲氧嘧啶酶聯(lián)免疫分析試劑盒的研制與應(yīng)用.pdf

1、磺胺類藥物具有廣泛的抗菌作用，經(jīng)常用于預(yù)防和治療畜禽細(xì)菌感染性疾病和原蟲病等，但使用不合理很容易在動物組織中造成殘留，對人們的健康造成潛在的危害，并嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的發(fā)展。許多國家和國際組織規(guī)定了磺胺類藥物在動物性組織中的最高殘留限量為0.1mg/kg。 國內(nèi)外已建立了很多理化方法檢測動物性食品中殘留的磺胺藥。雖然有些方法比較靈敏精確，但由于花費大、時間長、技術(shù)要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。ELISA方法是一種敏感性高、特

2、異性強、重復(fù)性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩選試驗又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點，作為一種快速、靈敏、特異的方法，酶聯(lián)免疫吸附測定正逐漸應(yīng)用于藥物的殘留檢測。本研究通過抗原的合成和抗體的制備，建立了SMD的ELISA測定方法，并檢測了實驗條件下雞體內(nèi)SMD的殘留變化。 為了制備針對SMD的單克隆抗體，用戊二醛法將SMD與牛血清白蛋白

3、(BSA)或卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)。用紫外分光光度計進行了掃描鑒定。該偶聯(lián)方法是通過SMD的N4端偶聯(lián)到載體蛋白上，在這種情況下，特異的N1端被免疫系統(tǒng)識別，從而產(chǎn)生針對SMD的高特異性抗體。 以制備的SMD-BSA人工抗原免疫BALB/c小鼠，取脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0-Ag14)融合。用間接ELISA和間接競爭ELISA篩選陽性細(xì)胞，經(jīng)過3次亞克隆篩選出3株穩(wěn)定分泌針對SMD抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞，擴大培養(yǎng)，注入BABL

4、/c小鼠的腹腔，制備腹水，獲得高效價的抗體。建立了間接競爭ELISA的測定方法，檢測限為1.766ng/ml，定量限為11.274ng/ml。用SD、SMM、SQ等8種藥物作為競爭抗原，做ELISA實驗，結(jié)果顯示抗體與這8種磺胺藥沒有交叉反應(yīng)。 動物肌肉、肝臟和腎臟等樣品經(jīng)組織分散，通過乙腈-水溶液提取，離心后吸取部分上清液，再加水和乙酸乙酯提取，將有機層吹干后用堿性PBS溶解，加入正己烷后振蕩去脂肪。水相經(jīng)調(diào)節(jié)pH后作為待測溶