RGD肽抗纖維連接蛋白介導的膀胱癌化療抵抗的實驗研究.pdf

1、膀胱移行細胞癌(Bladdertransitionalcellcarcinoma，BTCC)是我國泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，嚴重危害人民的身體健康。近年來，手術方法不斷改進，灌注藥物日益更新，但膀胱腫瘤術后5年復發(fā)率仍高達50～70％。提高化療藥物的敏感性是延長BTCC病人無瘤生存時間和改善生存質量的途徑。我們的前期體外實驗證實纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)介導了BTCC的多藥抵抗(Multidrugresistance，

2、MDR)，是導致膀胱癌化療效果下降的原因之一。本研究分二部分： 第一部分，探討外源性精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽(Arg-Gly-Asptripeptide，RGD肽)是否可在體外減少甚至逆轉FN介導的膀胱癌化療抵抗；第二部分，動物體內(nèi)研究，觀察RGD肽聯(lián)合絲裂霉素C(Mitomycin，MMC)對荷人膀胱癌T24裸鼠腫瘤生長是否具有抑制作用。本研究旨在為FN拮抗劑RGD肽應用于BTCC提供理論及實驗依據(jù)。 第一部分RG

3、D肽抗纖維連接蛋白介導的膀胱癌化療抵抗的體外實驗研究目的探討RGD肽是否可在體外減少甚至逆轉FN介導的膀胱癌化療抵抗。 材料與方法根據(jù)施加影響因素不同，實驗組細胞分為BSA組(BO組)、FN組(FO組)、RGD肽組(RO組)、FN+RGD肽組(RF組)，其中1％的BSA、20μl/ml的FN按50μl/孔預先包被細胞培養(yǎng)板，孵育24h，加入不同濃度的MMC，用MTT比色法檢測作用后不同時間(2h、12h、24h)腫瘤細胞的生存率

4、，用熒光染色法和ANNEXINV流式細胞分析儀檢測不同時間腫瘤細胞的凋亡率。 結果1.MMC作用2h、12h、24h后的生存率：BO組分別為33.4％、27.0％和24.9％；FO組分別為56.1％、46.9％和47.4％；RO組分別為28.5％、23.9％和22.2％；RF組分別為33.6％、26.6％和25.5％。FO組細胞生存率顯著高于RF組(P＜0.05)； 2.MMC(100mg/L)作用2h后各組細胞在熒光染

5、色顯微鏡下觀察調亡細胞比例，排列順序從高到低為RO組、BO組、RF組、FO組，MMC作用12h后這種差別依然存在，顯示RGD肽可拮抗FN的細胞保護作用；3.ANNEXINV流式細胞術檢測FO組細胞在MMC作用2h、12h的平均凋亡率分別為7.26％、9.34％；BO組分別為11.72％、15.74％；RO組平均凋亡率分別為15.85％、18.96％；RF組平均凋亡率分別為11.68％、15.40％；FO組和RF組細胞平均凋亡率差別具有統(tǒng)

6、計學意義(P＜0.05)，同樣表明RGD肽可拮抗FN的細胞保護作用。 結論1.FN具有對抗MMC產(chǎn)生的BTCC細胞凋亡作用；2.RGD肽可減少或抑制FN介導的MDR。 第二部分RGD肽聯(lián)合絲裂霉素C對荷人膀胱癌T24裸鼠腫瘤生長的抑制作用目的研究FN拮抗劑RGD肽聯(lián)合絲裂霉素C對荷人膀胱癌T24裸鼠腫瘤生長的抑制作用。 材料與方法建立人膀胱癌T24裸鼠皮下異體移植模型(n=32)。接種4周全部成瘤后，將動物隨機分

7、為4組：對照組(n=8)：瘤體局部注射生理鹽水；RGD組(n=8)：瘤體局部注射RGD6μg/g，3d1次；MMC組(n=8)：瘤體局部注射MMC2μg/g，3d1次；RGD+MMC組(n=8)：瘤體局部注射RGD6μg/g和MMC2μg/g，3d1次。連續(xù)治療5周，裸鼠每周稱重2次，測量腫瘤2次，治療5周后處死動物，取出腫瘤稱重計算抑瘤率。 結果1.RGD+MMC組、MMC組腫瘤生長速度明顯慢于對照組和RGD組； 2.

8、RGD+MMC組、MMC組腫瘤體積分別為(351.4±86.5)mm3及(520.6±121.9)mm3，均明顯小于對照組[(1613.9±460.2)mm3，P＜0.05]；RGD+MMC組、MMC組腫瘤重量分別為(366.5±93.4)mg及(534.7±135.6)mg，均明顯小于對照組[(1639.5±479.2)mg，P＜0.05]；3.單用RGD組的腫瘤抑瘤率為2.2％，對膀胱癌生長無明顯抑制作用；RGD+MMC、MMC組抑