辛伐他汀干預(yù)下對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)高遷移率族蛋白1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 1、探討最佳的動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型的制作方法，觀察粥樣硬化斑塊的組織病理學(xué)變化。
　　 2、觀察動(dòng)脈粥樣硬化大鼠高遷移率族蛋白1(HMGB-1)的蛋白及基因表達(dá)變化，以揭示與炎癥相關(guān)的動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制。
　　 3、觀察辛伐他汀對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠HMGB-1的蛋白及基因表達(dá)及斑塊形態(tài)學(xué)的影響，以揭示辛伐他汀對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.采用單純高脂飲食飼養(yǎng)

2、、維生素D3連續(xù)灌胃結(jié)合高脂飲食飼養(yǎng)、維生素D3每周間隔灌胃結(jié)合高脂飲食飼養(yǎng)三種方法誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型，比較三種方法的模型建立情況，HE染色觀察大鼠主動(dòng)脈血管動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織病理學(xué)變化。
　　 2.免疫組織化學(xué)染色法觀察大鼠主動(dòng)脈血管動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)HMGB-1的蛋白表達(dá)情況，real-time PCR法檢測大鼠主動(dòng)脈血管HMGB-1的基因表達(dá)變化。
　　 3.辛伐他汀2.5mg/(kg.d)灌胃進(jìn)行干預(yù)，

3、分別給藥2周、4周，應(yīng)用上述方法進(jìn)行組織病理學(xué)觀察及HMGB-1的蛋白及基因表達(dá)檢測。
　　 結(jié)果：1、動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型成功：單純高脂飼料喂養(yǎng)大鼠2個(gè)月體重增長不明顯，留取主動(dòng)脈標(biāo)本，見主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，未見斑塊形成，高脂飼料喂養(yǎng)同時(shí)加維生素D3灌胃后2個(gè)月后可見主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯鈣化斑塊，呈環(huán)狀，斑塊遍及整條動(dòng)脈。2、辛伐他汀干預(yù)后可明顯抑制斑塊形成：2周干預(yù)組可見斑塊面積明顯減少，4周干預(yù)組斑塊面積較2周組進(jìn)一步減少，呈粟粒狀

4、，部分僅表現(xiàn)為內(nèi)膜不光滑，未見明顯斑塊形成。3、HMGB-1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的表達(dá)：(1)免疫組化：正常血管壁內(nèi)存在HMGB-1表達(dá)，位于血管內(nèi)皮細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)HMGB-1分部不均勻，炎癥細(xì)胞浸潤區(qū)和壞死區(qū)周邊基質(zhì)內(nèi)表達(dá)明顯增高，炎癥細(xì)胞浸潤區(qū)內(nèi)以單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞胞核、胞漿和間質(zhì)內(nèi)表達(dá)為主，后者成條帶狀分布于壞死區(qū)邊緣，單純高脂飲食組斑塊內(nèi)HMGB-1表達(dá)較辛伐他汀4周組表達(dá)陽性率顯著升

5、高，辛伐他汀2周組HMGB-1表達(dá)較單純高脂飲食組明顯減少，但較辛伐他汀4周組高。(2) HMGB2在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)基因水平的表達(dá)：RT-PCR法檢測各組動(dòng)脈內(nèi)HMGB-1表達(dá)，與空白對(duì)照組比較，其余各組HMGB-1水平均明顯升高，差異有顯著性(P<0.01)，辛伐他汀干預(yù)組HMGB-1表達(dá)明顯低于低單純高脂飲食組(P<0.01)，但均明顯高于空白對(duì)照組，2周組HMGB-1表達(dá)高于4周組(P<0.01)。
　　 結(jié)論：