慢性乙型肝炎病毒感染者特異性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答與臨床轉(zhuǎn)歸.pdf

1、[目的]:研究乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同臨床轉(zhuǎn)歸的人群之間HBV特異性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答的差異,探討慢性HBV感染的免疫學(xué)發(fā)病機制,為進(jìn)一步研究乙肝的治療方法及疫苗研發(fā)提供依據(jù)。
　　 [方法]:從HBV感染者中選取慢性肝炎患者及攜帶者,在健康人群中招募乙肝康復(fù)者及注射疫苗人群,研究對象入選標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《慢性乙型肝炎防治指南2010版》。采集研究對象外周血標(biāo)本分離外周血淋巴細(xì)胞(PBMC),以不加抗原的培養(yǎng)基作為空白對照,以人類免

2、疫缺陷病毒HIV-p24抗原作為陰性對照,植物血凝素(PHA)作為陽性對照,分別用HBsAg、HBcAg及覆蓋HBcAg全長的肽段庫作為特異性抗原刺激并培養(yǎng)細(xì)胞。采用CFSE染色及流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測細(xì)胞增殖情況。經(jīng)多色流式細(xì)胞術(shù)標(biāo)記細(xì)胞表面CD3、CD4、CD8及CD45RA、CCR7,檢測不同亞群淋巴細(xì)胞的增殖及分化情況。
　　 [結(jié)果]:按照入組標(biāo)準(zhǔn)共選取了43人入組,其中慢性乙型肝炎患者10人,攜帶者10人,乙肝感染后康

3、復(fù)者13人,注射疫苗對照組10人。結(jié)果發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞對乙肝S抗原的特異性增殖較好,而HBcAg及HBcAg肽段庫刺激下的T細(xì)胞均未發(fā)生明顯增殖。各組對HBsAg的增殖存在顯著性差異,其中乙肝康復(fù)者中發(fā)生了特異性T細(xì)胞增殖的比例為3.40％(1.65％,25.30％),要顯著好于慢性乙型肝炎組的1.25％(0.08％,3.50％)及攜帶者組的0.40％(0.00％,3.68％),慢性肝炎組與攜帶者組之間無明顯差異。對發(fā)生特異性增殖的T細(xì)胞進(jìn)一

4、步分析,發(fā)現(xiàn)CD45RA-CCR7+T細(xì)胞比例最高,且各組間存在統(tǒng)計學(xué)差異。乙肝康復(fù)者組中發(fā)生增殖的CD45RA-CCR7+T細(xì)胞的比例為52.61％±8.80％,要高于慢性肝炎組的48.06％±13.75％及攜帶者組的42.03％±13.78％,并與攜帶者組之間有顯著性差異。
　　 [討論]:本研究提示慢性HBV感染者可能存在特異性T細(xì)胞的應(yīng)答缺陷,其對乙肝抗原的特異性增殖要弱于乙肝康復(fù)者；T細(xì)胞對HBsAg的特異性增殖要好于