胸腺基質(zhì)淋巴生成素對肺癌患者輔助性T細(xì)胞極化的影響.pdf

1、目的:通過建立DC體外模型的方法,研究胸腺基質(zhì)淋巴生成素(thymicstromallymphopoietin,TSLP)對腫瘤免疫Th1/Th2漂移的影響,更進(jìn)一步拓展Th細(xì)胞的分化機(jī)制,也為免疫治療開辟新的途徑。本實(shí)驗(yàn)通過檢測TSLP在肺癌患者中的表達(dá)和TSLP刺激后DC的表型和細(xì)胞因子分泌的影響,以及觀察TSLP-DC對Th細(xì)胞分化的影響,探討Th1/Th2漂移的免疫學(xué)機(jī)理及其在肺癌發(fā)病及病情發(fā)展中的作用。
　　 方法:本

2、實(shí)驗(yàn)收集30例肺癌患者的腫瘤組織、正常肺組織、轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織,采用免疫組化方法檢測TSLP表達(dá),分析TSLP在肺癌腫瘤組織、正常肺組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)評分差異；收集肺癌患者外周血,應(yīng)用GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為DC作為體外模型,分別用脂多糖(LPS)、rhTSLP或rhTSLP+LPS誘導(dǎo)成熟,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子的表達(dá)變化；ELISA方法檢測DC細(xì)胞因子變化。采用磁珠分選CD4+T細(xì)胞,

3、并分別將imDCs、DCs/LPS、DCs/TSLP與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng),以誘導(dǎo)Th細(xì)胞分化,用計數(shù)γ-干擾素(IFN-γ)與重組人白細(xì)胞介素-4(IL-4)釋放的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT),計算每組釋放IFN-γ與IL-4細(xì)胞數(shù),判斷rhTSLP誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞的分化方向。
　　 結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,TSLP在正常肺組織不表達(dá)或極低量表達(dá),在腫瘤組織及陽性淋巴結(jié)中的評分都顯著高于陰性淋巴結(jié)(P<0.05),在

4、肺癌組織中的表達(dá)量又顯著高于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(P<0.05)。流式細(xì)胞儀檢測DC表型結(jié)果顯示:TSLP-DC組和LPS-DC組表面標(biāo)志物(包括CD83、CD86、CD11c、CD14、OX40L、HLA-DR)表達(dá)無顯著差異,TSLP-DC組和LPS-DC組CD83與CD86表達(dá)顯著高于im-DC組。ELISA檢測DC上清結(jié)果顯示:刺激后的DC培養(yǎng)上清液的ELISA檢測結(jié)果顯示,LPS-DC組的IL-6、IL-12、TNF-α、IL-10顯著

5、高于im-DC組與TSLP-DC組(P<0.05),而后兩者沒有差異；TSLP-DC組的TGF-β顯著高于LPS-DC組與im-DC組(P<0.05),后兩者沒有差異；而IFN-γ在各組之間沒有差異(P=0.19),LPS-DC組與im-DC組間比較(P=0.088)。DC細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞共孵育后ELISPOT結(jié)果示:IL-4因子ELISPOT結(jié)果示:TSLP-DC組斑點(diǎn)計數(shù)顯著高于im-DC組及LPS-DC組,后兩者沒有顯著差異；

6、IFN-γ因子ELISPOT結(jié)果示,TSLP-DC組斑點(diǎn)計數(shù)顯著低im-DC組及LPS-DC組,后兩者沒有顯著差異。
　　 結(jié)論:(1)TSLP在腫瘤組織及陽性淋巴結(jié)中的表達(dá)都顯著高于陰性淋巴結(jié),在正常肺組織中無表達(dá)或低表達(dá),提示TSLP在腫瘤組織中的表達(dá),可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移和進(jìn)展有一定的相關(guān)性；(2)TSLP可誘導(dǎo)DC的分化成熟,與未經(jīng)任何刺激的DC相比,經(jīng)TSLP刺激的DC與LPS-DC相似,能顯著上調(diào)共刺激分子CD86和成熟