母鼠妊娠前慢性不可預見性應激對子代血清CRH、COR和海馬PKA、p-CREB(ser133)的影響.pdf

1、背景和目的：
　　目前研究發(fā)現(xiàn)母體在妊娠各階段接受慢性不可預見性應激（chronic unpredictable stress, CUS）均可引起子代神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常，并在一定程度上導致子代出現(xiàn)學習、記憶能力障礙及行為的異常。母源性應激對子代的影響機制極為復雜，目前研究認為主要與下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamic pituitary adrenal, HPA）軸、單胺類神經(jīng)遞質(zhì)通路和神經(jīng)肽有關。本課題組前面的研究中也發(fā)

2、現(xiàn)，母鼠妊娠前接受CUS亦可導致子代血清皮質(zhì)醇（ cortisol, COR）升高，并與子代海馬中的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、神經(jīng)細胞黏附因子（neural cell adhesion molecule, NCAM）、N-甲基-D天冬氨酸受體2B(N-methyl-D-aspartate receptor2B, NR2B)表達呈負相關，此外我們還發(fā)現(xiàn)母鼠妊娠前接受

3、慢性應激的胎鼠，其大腦海馬和額前皮質(zhì)的5-HT1A受體 mRNA轉錄水平顯著下降,5-羥色胺（5-hydroxtryptamine,5-HT）代謝紊亂。關于妊娠前 CUS對子代的影響，目前研究仍處于初級階段，具體機制需進一步探索。本實驗通過建立 SD大鼠 CUS模型，使母鼠于CUS后短期內(nèi)受孕，并在母鼠 CUS終止后、分娩結束時和所產(chǎn)子鼠28日齡時分別檢測血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin- releasing h

4、ormone，CRH）和COR水平，并通過分析28日齡子鼠海馬蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)和ser133位點磷酸化的環(huán)磷酸腺苷反應元件結合蛋白（cAMP response element binding protein，P-CREB）表達水平，更深入地探討母體孕前CUS對子代神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及學習記憶能力的影響。
　　材料和方法：
　　SD系成年雌性大鼠隨機分為正常對照母鼠組（13只）和孕前CUS母鼠

5、組（12只）。采用11種刺激方法對 CUS母鼠組進行21天 CUS。CUS模型建立完畢后，兩組母鼠分別進行斷尾取血留待CRH和COR檢測。將正常對照母鼠組和CUS母鼠組分別與成年健康雄性大鼠按2-3:1合籠飼養(yǎng)1周，每天早上8:00對母鼠進行陰道分泌物涂片檢查，以顯微鏡下查看到精栓為妊娠的標志，確定已受孕的母鼠則單籠飼養(yǎng)至依次分娩，于分娩后6小時內(nèi)斷尾取血。將子代大鼠按性別分為正常雌性子代組（CF）、正常雄性子代組（CM）、CUS雌性子

6、代組（CUSF）和CUS雄性子代組（CUSM）4組，每組各18只。在子代大鼠28日齡時進行斷頭取腦、采血，應用 Elisa法測定其血清中CRH、COR水平，用免疫組織化學方法測定其海馬中PKA、p-CREB(ser133)的表達情況，并將CUS子代組與同期受孕的正常子代組進行同性別間對照研究。
　　結果：
　　1.母鼠應激結束時，CUS組和對照組的血清CRH分別為（25.19±5.74）pg/ml和（17.34±2.41）p

7、g/ml（P＜0.01）,CUS組和對照組的血清COR分別為（102.34±9.73）ng/ml和（88.41±8.72）ng/ml（P＜0.01），CUS組均增高。受孕母鼠分娩結束時，CUS組和對照組的血清 CRH分別為（52.47±16.04）pg/ml和（23.09±3.86）pg/ml（P＜0.01）,CUS組和對照組的血清COR分別為（124.25±9.61）ng/ml和（107.49±7.56）ng/ml（P＜0.01）；兩

8、者在CUS組仍高于對照組。分娩結束后兩組母鼠血清CRH、COR水平均較CUS結束時高，自身前后對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。
　　2.子鼠28日齡時CUSF組和CF組的CRH水平分別為（26.60±1.10）pg/ml和（15.70±4.72）pg/ml，COR水平分別為（117.80±14.87）ng/ml和（95.73±17.65）ng/ml；CUSM組和CM組CRH水平分別為（31.86±18.26）p

9、g/ml和（16.65±8.35）pg/ml，COR水平分別為（114.16±17.68）ng/ml和（84.89±11.62）ng/ml，同性別組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。
　　3.子鼠海馬的PKA表達 CA1區(qū) CUSF組、CF組平均灰度值分別為211.24±12.10、198.46±12.17，在 CUSM組、CM組分別為212.13±6.43、199.29±6.36；在 CA3區(qū) CUSF組、CF組

10、平均灰度值分別為205.69±8.07、189.52±12.76,在CUSM組、CM組分別為205.29±15.01、195.15±8.94, CUS組子鼠海馬CA1、CA3區(qū)PKA表達均較對照組子鼠低，同性別組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。
　　4.子鼠海馬的p-CREB(ser133)表達 CA1區(qū)CUSF組、CF組平均灰度值分別為237.14±5.69、230.84±3.23，在 CUSM組、CM組分別為

11、238.56±5.47、228.46±8.15；在 CA3區(qū)CUSF組、CF組平均灰度值分別為231.55±9.11、221.40±7.49，在CUSM組、CM組分別為231.84±7.73、222.82±10.61,在DG區(qū)CUSF組、CF組平均灰度值分別為230.23±5.71、219.23±7.33，在CUSM組、CM組分別為230.47±5.65、220.94±6.72； CUS組子鼠海馬CA1、CA3和DG區(qū)p-CREB(se

12、r133)表達均較對照組子鼠低，同性別組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　5.子鼠28日齡時海馬CA1、CA3區(qū)PKA表達與血清CRH及COR水平呈負相關，在CA3和DG區(qū)p-CREB(ser133)表達與血清COR水平呈負相關。
　　結論：
　　1、妊娠前接受CUS的母鼠 HPA軸亢進。CUS結束后短期內(nèi)受孕，其HPA軸亢進持續(xù)存在于整個妊娠階段乃至分娩后。
　　2、母鼠妊娠前接受CUS后短期內(nèi)受孕，因