HCV核心蛋白與NS4B對(duì)HepG2細(xì)胞Wnt1、β-catenin、c-myc及CyclinD1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白（C）與非結(jié)構(gòu)蛋白4B（NS4B）對(duì)HepG2細(xì)胞中Wnt1、β-catenin、c-myc及CyclinD1表達(dá)的影響，以探索HCV核心蛋白、NS4B與細(xì)胞增殖的關(guān)系及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將HCV1b型核心蛋白與NS4B的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)C、pcDNA3.1(-) NS4B分別和共同瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，同時(shí)以轉(zhuǎn)染空載體pcDNA

2、3.1(-)和未轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞作為對(duì)照。RT-PCR及Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中核心蛋白與NS4B mRNA及蛋白的表達(dá)；運(yùn)用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中Wnt1、β-catenin、c-myc及CyclinD1的表達(dá)水平；MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，觀察核心蛋白與NS4B對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期情況。
　　結(jié)果：
　　1.重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)C、

3、pcDNA3.1(-) NS4B分別和共同瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，成功表達(dá)HCV C、NS4B mRNA及蛋白。
　　2. pcDNA3.1(-)C組、pcDNA3.1(-)NS4B組、pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-) NS4B組的HepG2細(xì)胞中Wnt1、β-catenin、c-myc、CyclinD1 mRNA與蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于空白對(duì)照組和pcDNA3.1(-)組(p<0.01)；pcDNA3.1(-)C

4、組、pcDNA3.1(-)NS4B組及pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-)NS4B組間兩兩比較無明顯差別(P>0.05)；空白對(duì)照組與pcDNA3.1(-)組比較無明顯差別(P>0.05)。
　　3.轉(zhuǎn)染后1~4天，pcDNA3.1(-)C組、pcDNA3.1(-)NS4B組、pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-)NS4B組的HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)速度均快于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p<0.01)，其

5、余組間的細(xì)胞生長(zhǎng)速度相比較均無明顯差別(P>0.05)。
　　4. pcDNA3.1(-)C組、pcDNA3.1(-)NS4B組、pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-) NS4B組與空白對(duì)照組及pcDNA3.1(-)組相比，Go/GI期細(xì)胞減少，S期和G2/M期細(xì)胞增多(p<0.01)，其余組間的Go/GI期，S期及G2/M期細(xì)胞分別相比較均無明顯差別(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. HCV核心蛋白與