抗人前列腺癌PSA抗體-SPIO及抗人前列腺癌HER-2-neu抗體-SPIO的制備及二者在PC-3和LNCaP細胞系中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：1.制備前列腺癌抗體造影劑抗PSA抗體-SPIO和抗HER-2/neu抗體-SPIO。利用電鏡檢測其粒徑和形態(tài)，并測定兩種抗體與SPIO的結(jié)合率。 2.培養(yǎng)前列腺癌LNCaP 細胞和PC-3 細胞，并用免疫細胞化學方法檢測兩細胞PSA 和HER-2/neu 的表達。 3.利用電鏡、流式細胞儀、磁共振分析抗體造影劑對LNCaP 細胞和PC-3 細胞的靶向效果。 方法： １.采用化學交聯(lián)法制備兩種抗體造

2、影劑抗PSA 抗體-SPIO 和HER-2/neu 抗體-SPIO。利用電鏡進行檢測，同時Folin-酚法檢測抗體與SPIO 的結(jié)合率。 2. 培養(yǎng)人前列腺癌LNCaP 細胞和PC-3 細胞；免疫細胞化學（SP法）分別檢測兩細胞PSA 和HER-2/neu 的表達。 3. 采用流式細胞術(shù)對樣品（抗PSA 抗體、抗HER-2/neu 抗體、抗PSA 抗體-SPIO、抗HER-2/neu 抗體-SPIO）和兩細胞（LNCaP

3、 細胞和PC-3 細胞）的結(jié)合進行測試，測定McAb-SPIO 的抗體活性。 4.利用電鏡檢測McAb-SPIO 進入細胞內(nèi)的情況和活性，利用MR檢測兩McAb-SPIO 對細胞的靶向增強作用。 結(jié)果： 1.經(jīng)電鏡觀察和洗脫液的蛋白含量測定，得到抗體與SPIO 有效的結(jié)合在一起，抗PSA 抗體與SPIO 交聯(lián)率為96.5％ ，抗HER-2/neu抗體與SPIO 95.7％。經(jīng)電鏡觀察靶向造影劑粒徑在50-100n

4、m 之間。 2.免疫細胞化學檢測LNCaP 細胞PSA 表達呈陽性，HER-2/neu表達為陰性。PC-3 細胞HER-2/neu 表達呈陽性，PSA 表達為陰性。 3.流式細胞術(shù)檢測LNCaP 與抗PSA 抗體-SPIO 以及抗PSA 抗體結(jié)合率高，PC-3 與抗HER-2/neu 抗體-SPIO 及抗HER-2/neu 抗體結(jié)合率高。 4.電鏡檢查LNCaP 細胞中加抗PSA 抗體-SPIO 細胞漿內(nèi)鐵粒子量

5、明顯高于其他兩組；PC-3 細胞中加抗HER-2/neu 抗體-SPIO 組胞漿內(nèi)鐵粒子量明顯高于其他。 5.MR檢查LNCaP細胞中加抗PSA抗體-SPIO組和PC-3細胞中加抗HER-2/neu抗體-SPIO組T2WI信號明顯降低。 結(jié)論：本實驗成功構(gòu)建了靶向前列腺癌LNCaP 細胞PSA 的探針抗PSA 抗體-SPIO 和靶向PC-3 細胞HER-2/neu 的探針抗HER-2/neu 抗體-SPIO，均具有良好的