細(xì)胞角蛋白在口腔扁平苔蘚中表達(dá)的電泳研究.pdf

1、目的：口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是發(fā)生在口腔粘膜的一種常見的慢性炎性疾病，同時(shí)可伴有皮膚損害。目前認(rèn)為OLP是細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)，但OLP病損形成的初始抗原和致病的確切途徑目前仍然不清楚，臨床治療相當(dāng)困難。角質(zhì)細(xì)胞(keratinocyte)是為人們逐漸認(rèn)識的一種重要免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，而細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin，CK)的表達(dá)與上皮角質(zhì)細(xì)胞的增殖分化密切相關(guān)。CK是中間纖維(intermedia

2、te filament，IF)家族成員之一，主要在上皮細(xì)胞中表達(dá)。目前發(fā)現(xiàn)的CK至少有20種，人們將它們分別命名為CK1-CK20，并根據(jù)分子量和等電點(diǎn)分Ⅰ型和Ⅱ型。CK對維持上皮細(xì)胞的形態(tài)和連續(xù)性非常重要，而且它們具有高度的保守性和組織特異性及分化特異性，并與細(xì)胞的分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、遷移、轉(zhuǎn)化和凋亡等生命活動(dòng)息息相關(guān)。由于CK在復(fù)層上皮中表達(dá)的多樣性和廣泛性，目前有關(guān)CK在OLP病損中的研究國內(nèi)尚未見報(bào)道，國外也不多見，研究結(jié)論不完全一

3、致。系統(tǒng)檢測OLP病損口腔粘膜和健康人群正常口腔粘膜中CK的異同，明確OLP病變中細(xì)胞角蛋白在表達(dá)類型和分布上的可能改變，分析其改變與OLP的發(fā)生、預(yù)后之間的可能關(guān)系，有利于OLP的治療和預(yù)防，為進(jìn)一步研究OLP的病因，更好的闡述OLP的發(fā)病機(jī)理打下基礎(chǔ)。 方法： 1．收集標(biāo)本：局麻下切取OLP患者頰部組織，分為兩份，一份做HE染色明確診斷，一份存于-70℃液氮中，收集病理診斷為OLP的標(biāo)本15例。對照組5例，將液氮中的

4、標(biāo)本浸入3mmol/L EDTA無鈣鎂磷酸鹽緩沖液中，pH7.3，37℃，2h。 2．分離口腔上皮。 3．提取細(xì)胞角蛋白。 4．紫外分光光度計(jì)測濃度。 5．SDS-PAGE電泳：將提取出來的細(xì)胞角蛋白加入上樣緩沖液后按照垂直電泳的操作方式跑膠。 6．Westem blot：采用廣譜細(xì)胞角蛋白抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗證實(shí)電泳的蛋白條帶是細(xì)胞角蛋白。 7．在SDS-PAGE凝膠上計(jì)算預(yù)染M

5、arker的遷徙率做出曲線，算出蛋白條帶的遷徙率，在曲線中對照計(jì)算出每條條帶的分子量，從而明確每條條帶具體的類型，找出異常蛋白條帶。 結(jié)果：SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)OLP組出現(xiàn)CK1、CK11、CK13、CK14、CK16、CK17，對照組出現(xiàn)CK1、CK2、CK3、CK4、CK5、CK11、CK13、CK14、CK16的表達(dá)。 結(jié)論： 1．機(jī)體患OLP時(shí)上皮分化產(chǎn)生CK1使上皮增厚，增強(qiáng)頰粘膜的抵抗性。