TopBP1和ATR在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、[研究目的]
　　 基因組完整性對(duì)于生物體的生存是至關(guān)重要的，DNA損傷應(yīng)答通過(guò)逆轉(zhuǎn)外源性和內(nèi)源性DNA損傷促進(jìn)分裂細(xì)胞忠實(shí)傳遞基因組，并且對(duì)于復(fù)制期間細(xì)胞生存也是必要的。由于染色體不穩(wěn)定和腫瘤之間存在密切聯(lián)系，推測(cè)DNA損傷應(yīng)答系統(tǒng)缺陷可能對(duì)乳腺癌發(fā)生發(fā)展起主要的促進(jìn)作用。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱβ結(jié)合蛋白1(TopBP1)、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張突變和Rad3相關(guān)蛋白（ATR）是DNA損傷應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)的兩個(gè)重要成員，而且TopBP1對(duì)于

2、ATR的充分激活是必需的。既往研究顯示TopBP1和ATR的突變或多態(tài)性與人類(lèi)腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，本研究通過(guò)構(gòu)建組織芯片利用免疫組化方法檢測(cè)這兩個(gè)蛋白在乳腺癌，特別是三陰性乳腺癌中的表達(dá)，并分析與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，旨在闡明TopBP1和ATR是否在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并為三陰性乳腺癌臨床治療策略的選擇提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 [研究方法]
　　 第一部分:從上海長(zhǎng)海醫(yī)院和黃浦區(qū)中心醫(yī)院收集272例乳腺癌組織

3、和118例癌旁組織構(gòu)建組織芯片，使用免疫組化Enyision法檢測(cè)TopBP1和ATR的表達(dá)情況，兔抗人多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。每個(gè)病例根據(jù)染色強(qiáng)度計(jì)分和陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分的乘積綜合評(píng)定為染色陰性或陽(yáng)性。相關(guān)臨床病理信息如患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及ER、PR、HER2、p53狀態(tài)等都收集起來(lái)以進(jìn)行相關(guān)性分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用SPSS19.0軟件進(jìn)行。分析癌組織和癌旁組織間蛋白表達(dá)

4、率的差異以及蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系使用Pearson卡方檢驗(yàn)，分析TopBP1和ATR表達(dá)水平間的相關(guān)性使用Spearman秩相關(guān)，影響蛋白表達(dá)的多因素分析采用logistic回歸。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 第二部分:從上海新華醫(yī)院收集78例三陰性乳腺癌組織和53例配對(duì)的癌旁組織制成組織芯片，同樣使用免疫組化方法檢測(cè)TopBP1和ATR的表達(dá)情況。所有78名患者加上第一部分研究中的

5、46名三陰性乳腺癌患者均進(jìn)行生存隨訪(fǎng)。使用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)操作。分析配對(duì)的三陰性乳腺癌與癌旁組織間蛋白表達(dá)率的差異使用McNemar檢驗(yàn)，蛋白不同表達(dá)水平間患者的總生存期(OS)使用Kaplan-Meier法估計(jì)并進(jìn)行l(wèi)og-rank檢驗(yàn)，影響生存的獨(dú)立預(yù)后因素使用Cox回歸模型進(jìn)行評(píng)估。
　　 [研究結(jié)果]
　　 第一部分:236例浸潤(rùn)性乳腺癌組織和113例癌旁組織同時(shí)獲得TopBP1和ATR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。免

6、疫組化染色顯示TopBP1在正常乳腺上皮幾乎完全表達(dá)在細(xì)胞核，而在乳腺癌組織中為胞核胞漿同時(shí)染色的異常表達(dá)。ATR在癌組織和癌旁組織均為胞核染色。與癌旁組織相比較，TopBP1和ATR在乳腺癌組織中的表達(dá)率顯著性增高(P＜0.001)。TopBP1表達(dá)在PR陽(yáng)性和p53陰性乳腺癌中顯著增高，而ATR表達(dá)在腫瘤大小為T(mén)1、分期Ⅰ期、HER2陰性和三陰性乳腺癌亞組中顯著降低(P＜0.05)。TopBP1和ATR的表達(dá)水平間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。多因

7、素logistic回歸顯示TopBP1表達(dá)與PR顯著性相關(guān)，ATR表達(dá)與腫瘤大小顯著性相關(guān)。
　　 第二部分:74例三陰性乳腺癌組織和53例配對(duì)的癌旁組織同時(shí)獲得了TopBP1和ATR的免疫組化染色結(jié)果。加上來(lái)自第一部分的46例，總共有120例三陰性乳腺癌進(jìn)入統(tǒng)計(jì)分析。與配對(duì)的癌旁組織相比，TopBP1在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)率顯著性增高（P＜0.001），而ATR在兩者間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TopBP1低表達(dá)與淋巴結(jié)陽(yáng)性

8、顯著相關(guān)（P＜0.01），而ATR表達(dá)水平與三陰性乳腺癌臨床病理參數(shù)間均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性，TopBP1和ATR的表達(dá)水平之間也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。三陰性乳腺癌患者按照不同的TopBP1、ATR和TopBP1/ATR表達(dá)水平分組的生存差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Cox回歸模型顯示TNM分期是影響三陰性乳腺癌患者總生存的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　 [研究結(jié)論]
　　 在乳腺癌組織中TopBP1和ATR的表達(dá)水平顯著性增高但二者之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。To

9、pBP1在乳腺癌細(xì)胞中出現(xiàn)胞核胞漿異位表達(dá)現(xiàn)象，且表達(dá)水平在乳腺癌中與PR和p53顯著性相關(guān)，在三陰性乳腺癌亞組中與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著性相關(guān)，這些都提示TopBP1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。ATR的表達(dá)水平在乳腺癌中與腫瘤大小、TNM分期、HER2狀態(tài)、三陰性表型相關(guān)，與其發(fā)揮DNA損傷應(yīng)答功能相一致，而與三陰性乳腺癌各臨床病理參數(shù)間均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性，其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用尚需進(jìn)一步研究。Cox回歸模型提示TNM分期是影響三陰性