葛根、決明子聯(lián)用對奶牛脂肪肝細胞NF-κB和CYP450表達的影響.pdf

1、脂肪肝病是奶牛常見的營養(yǎng)代謝性疾病，是困擾奶牛養(yǎng)殖業(yè)的一大難題。目前，奶牛脂肪肝的發(fā)病機制尚未明確。為了探討這一問題，本研究通過葛根和決明子聯(lián)合應用處理奶牛肝細胞，通過NF-κB和CYP450的表達，在細胞和分子水平探討奶牛脂肪肝的發(fā)病機制，為奶牛脂肪肝的防治提供依據(jù)。
　　本試驗通過膠原酶兩步灌流法獲取奶牛脂肪肝細胞，葛根和決明子處理，生化法測定肝細胞中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、甘油三酯(TG)

2、、總膽固醇(TC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的活性，ELISA法測定細胞色素P450酶(CYP450)、腫瘤細胞壞死因子-α(TNF-α)的濃度，Western Blot法檢測肝細胞中核因子-κB(NF-κB)蛋白的表達水平。
　　結(jié)果顯示，2h后肝細胞附著于底壁，呈卵圓狀，6h后肝細胞少量漂浮，輪廓明顯，12h后個別細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡，體積增大，24h后有細小的偽足出現(xiàn)，36h后細胞呈島嶼狀連接。油紅“O”染色后可

3、見肝細胞內(nèi)大量染料侵染。
　　葛根處理24h后，50、100、150μg/mL葛根均能降低AST、ALT、TG、TC、MDA、TNF-α、CYP450的活性或含量，提高SOD的活性(P＜0.05或P＜0.01)。處理48h后，50、100、150μg/mL組葛根均能降低AST、ALT、TG、TC、MDA、CYP450的活性或含量，提高SOD的活性(P＜0.05或P＜0.01)，10、50、100、150μg/mL組葛根能降低TNF

4、-α的濃度(P＜0.05或P＜0.01)。
　　決明子處理24h后，50、100、150μg/mL組決明子均能降低AST、ALT、TG、TC、MDA、TNF-α、CYP450的活性或含量，提高SOD的活性(P＜0.05或P＜0.01)。處理48h后，50、100、150μg/mL決明子均能降低AST、ALT、TG、TC、MDA、TNF-α、CYP450的活性或含量，提高SOD的活性(P＜0.05或P＜0.01)。
　　葛根和

5、決明子聯(lián)合用藥處理奶牛脂肪肝細胞24h、48h后，各組均能夠顯著降低AST、ATL、TG、TC、MDA、TNF-α和CYP450的活性或含量，提高SOD的活性（P＜0.05or P＜0.01），其中50μg/mL葛根和50μg/mL決明子配比，改善程度優(yōu)于其他聯(lián)合用藥組數(shù)據(jù)。
　　Western Blot結(jié)果顯示，葛根處理24h后，各濃度對NF-κB的表達無明顯變化;處理48h后，當葛根濃度為50μg/mL時，NF-κB的表達逐漸

6、減弱。決明子處理24h后，各濃度對NF-κB的表達無明顯變化;處理48h后，當決明子濃度為50μg/mL時，NF-κB的表達逐漸減弱。葛根和決明子聯(lián)合處理24h、48h后，各組均對NF-κB的表達起到明顯抑制效果，其中50μg/mL葛根和50μg/mL決明予配比，抑制效果最為明顯。
　　結(jié)論:經(jīng)膠原酶二步灌流法獲得的肝細胞，存活率可達87％左右。葛根和決明子聯(lián)合用藥，使NF-κB和CYP450的表達量降低，并能夠顯著降低脂肪變性肝