斑蝥酸鈉對人胃癌及食管癌細胞作用的體外實驗研究.pdf

1、南京中醫(yī)藥大學碩士學位論文斑蝥酸鈉對人胃癌及食管癌細胞作用的體外實驗研究姓名：梁楓申請學位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結合基礎指導教師：王明艷20060201由京中醫(yī)藥大學2 0 0 6 年同等學力人員申請碩士學位論文中文摘要研究目的：( 1 ) 觀察不同濃度的斑蝥酸鈉對人胃癌細胞株B G C 8 2 3 和人食管癌細胞株E c a l 0 9 牛K 的影響；( 2 ) 研究斑蝥酸鈉塒細胞周期及細胞凋亡的影響；( 3 ) 研究斑蝥酸鈉對捌f

2、相關皋岡B c l 一2 、P 5 3 表達的影響。研究方法：( 1 ) 細胞培養(yǎng) 人胃癌細胞株B G C 8 2 3 由南京中醫(yī)藥大學傷寒教研竄惠贈；人食管癌細胞株E c a l 0 9 購于上海細胞所。將細胞培養(yǎng)于含1 0 ％新生牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液L } J ，在3 7 。C ，含5 ％C 0 2 的培養(yǎng)箱中孵育，長滿后用0 ．2 5 ％胰酶消化傳代。( 2 ) 細胞增殖抑制實驗 采用M 7 r T 法，

3、取處于指數(shù)生長期的人胃癌細胞株B G C 8 2 3 和人食管癌細胞株E c a l 0 9 ，加入適量o ．2 5 ％胰酶消化，用含1 0 ％新生牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液配成懸液，用血球細胞板計數(shù)，并以R P M l l 6 4 0 全成分培養(yǎng)液稀釋兩種絀胞懸液，各配成2 x 1 0 5 ／m l ，取9 6 孔細胞板，每孔』』I J 細胞懸液1 8 0 9 l 。將藥液2 0 9 1 分別加入各孔細胞懸液中，每

4、個劑量重復4 孔。將含人胃癌細胞株B G C 8 2 3 、人食管癌細胞株E c a l 0 9 的細胞板在3 7 。C ，含5 ％C 0 2 的培養(yǎng)箱巾分別孵育8 h 、1 2 h 、2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后墩出絀胞培養(yǎng)板，M r I 、T 用無血清R P M l l 6 4 0培養(yǎng)液配成1 m g ／m l 溶液，每孔加1 0 0 9 l ，3 7 ℃溫何4 h ，使M ‘門還原為f o r l n a z a n

5、 ，吸出上清液，力¨入1 0 0 I I t l D M S O 使f o r m a z a n 溶解，混懸儀混勻后川酶標儀在4 9 0 n m處測定每孔光密度( A ) 。計算抑制率( ％) ( 卜實驗組A ／X , I 照組A ) x 1 0 0 ％。( 3 ) 形態(tài)學觀察 用不同濃度的斑蝥酸鈉處理人胃癌細胞株B G C 8 2 3 和人食管癌細胞株E c a l 0 9 后，在倒置顯微鏡下觀察用藥組細胞形j 念變化，并

6、攝影。( 4 ) 細胞周期和細胞凋亡測定 耿處于指數(shù)生長期的人胃癌細胞株B G C 8 2 3 加藥培養(yǎng)1 2 h 、2 d h 后，人食管痛細胞株E t a l 0 9 加藥培養(yǎng)2 4 h 后，用適量0 ．0 2 ％E D T A進行消化，制成單細胞懸液，1 0 0 0 r ／m i n 離心，P B S 洗滌2 次，配成1 ×1 0 6 ／m l細胞懸液，7 5 ％冷乙醇2 0 ℃固定，上機測定前，離心去乙醇，用P B S