國蘭部分主栽品種遺傳多樣性及分子鑒定研究.pdf

1、國蘭是蘭科(Orchidaceae)蘭屬(Cymbidium)植物中的小型花地生蘭,具有極高的觀賞價值和文化價值。傳統(tǒng)意義上的國蘭主要包括7個種系:即春蘭系(Series Goeringii)、春劍系(Series Longibractium)、蕙蘭系(Series Faberi)、建蘭系(Series Ensifolium)、寒蘭系(Series Kanran)、墨蘭系(Series Sinense)和蓮瓣蘭系(Series Lian

2、pan),另有一些雜交種,已被命名的國蘭品種已經(jīng)多達(dá)到3000個以上。目前對國蘭種質(zhì)的研究仍主要集中于品種分類及遺傳育種方面,國內(nèi)外關(guān)于國蘭分子生物學(xué)方面的研究報道較少,在DNA水平上的遺傳多樣性及品種鑒定研究雖有報道但方法單一而缺乏系統(tǒng)性,品種覆蓋范圍也不夠廣泛。本研究收集了涵蓋7個種系的國蘭種質(zhì)樣本139份,運(yùn)用SRAP及ITS+trnH-psbA序列測定兩種分子標(biāo)記方法,對其開展了遺傳多樣性及品種分子鑒定的研究,主要結(jié)果如下:

3、r>　　1.以改進(jìn)的CTAB法提取國蘭基因組DNA,獲得的DNA可滿足SRAP分析及nrDNAITS和cpDNA psbA-trnH序列測定的要求。
　　2.采用正交設(shè)計方案優(yōu)化并建立了適合國蘭 SRAP-PCR反應(yīng)的最佳體系為:25μL體系中含10× PCR buffer2.5μL、50ng模板 DNA(2μl)、Mg2+2.5mmol·L-1(2.5μl)、dNTPs0.25mmol·L-1(1.56μl)、引物0.3μmol

4、·L-1(0.75μl)、TaqDNA聚合酶1U(0.25μl)、ddH2O15.44μl。
　　3.從208對 SRAP引物中篩選出17對多態(tài)性好且重復(fù)性高的引物,對供試材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增,共擴(kuò)增出DNA條帶489條,其中多態(tài)性譜帶484條,多態(tài)性比率(PPB)為98.89％;遺傳相似性系數(shù)變化范圍為0.59-0.91,觀測等位基因數(shù)(Na)平均值為2.0000,多態(tài)性信息含量(PIC)平均值為0.9376,每個位點(diǎn)的有效等位基

5、因數(shù)(Ne)平均值為1.4917,Nei’s基因多樣多樣性指數(shù)(H)平均值為0.2968, Shannon信息指數(shù)(I)平均值為0.4548,說明供試國蘭種質(zhì)具有豐富的遺傳多樣性;通過17對核心引物組合48條譜帶構(gòu)建139份國蘭種質(zhì)資源的分子身份證,置信概率達(dá)到99.99%。
　　4.國蘭 ITS目的序列核苷酸變化范圍為672bp-729bp,平均 GC含量為65.62%,平均變異位點(diǎn)72.2%,非變異位點(diǎn)54.4%,簡約化信息位

6、點(diǎn)21.1%。根據(jù)比對結(jié)果,國蘭不同種系間存在明顯的 AG、CT堿基顛換和部分堿基缺失;國蘭psbA-trnH序列長度變化范圍為804bp-905bp,平均GC含量為35.7%,平均變異位點(diǎn)占29.2%,非變異位點(diǎn)占70.3%,簡約化信息為點(diǎn)占6.1%。變異程度上ITS>psbA-trnH。
　　5.對國蘭種質(zhì)遺傳多樣性及分子鑒定研究所用方法的優(yōu)勢排序?yàn)?SRAP>psbA-trnH+ITS>ITS>psbA-trnH。七大種系中